Utilización de tarjetas FTA para el diagnóstico de Chagas Congénito

BALLERING GRISELDA; ALTCHEH, JAIME; GULIN, JULIÁN ERNESTO NICOLÁS; RUIZ, ANDRÉS MARIANO; RIVERO, ROCÍO; ESTEVA, MÓNICA INÉS; BISIO, MARGARITA

Resistencia, Chaco

Congreso; XXX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoologia; 2018

Sociedad Argentina de Protozoologia

Las tarjetas (FTA) poseen varias ventajas (en relación al volumen y conservación de las muestras) que permitirían, junto con los ensayos de Amplificación Isotérmica del ADN (LAMP), un diagnóstico rápido, ideal para los laboratorios de baja infraestructura. Permitiría además incluir la detección de Chagas congénito (ChC) en la pesquisa neonatal. El objetivo de este trabajo fue evaluar el rendimiento de FTA para conservar muestras de sangre en el contexto del diagnóstico molecular de ChC.Para evaluar la calidad del ADN obtenido se prepararon curvas de sangre de pacientes no infectados con dos conservantes (EDTA y GEB) con cantidades conocidas de tripomastigotes de cultivo. De cada punto de la curva se aplicaron 100 ul en FTA y 200 o 300 ul (EDTA y GEB respectivamente) para extraer el ADN utilizando columnas (Roche). Para evaluar la aplicación en el contexto de ChC se aplicaron en FTA 100 ul de muestras de sangre (EDTA) de: a) 4 ratones con infección aguda y crónica; b) 5 neonatos de madres con enfermedad de Chagas. Para obtener el ADN de las FTA se utilizaron dos círculos por muestra según indicaciones del fabricante. Se midió cantidad y calidad (relación 260/280) del ADN con nanodrop(R) y se calculó el valor de P (Mann?Whitney U). El ADN obtenido fue analizado por PCRq (Ramirez y col., 2013) y LAMP (Rivero y col. 2017).La calidad del ADN obtenido fue similar al utilizar columnas y FTA. La cantidad de ADN, obtenida a partir de las curvas artificiales, fue de 8,1- 31,4 ug/ul con FTA y de 6,5-30,6 ug/ul con columnas. No hubo diferencia significativa entre las cantidades obtenidas (p=0.31). La extracción por columna mostró un límite de detección por PCRq de 2 órdenes menores que por FTA tanto al aplicar muestras con EDTA como con GEB. Todos los ratones dieron positivos para las técnicas de amplificación molecular. Se observaron resultados 100% concordantes al analizar las muestras de pacientes por LAMP, parasitemia y PCRq, siendo un niño positivo y cuatro negativos. La obtención de muestras de sangre en FTA, con ambos anticoagulantes, permitió obtener ADN en cantidad y calidad suficiente para realizar ensayos moleculares. Si bien la extracción del ADN por columna fue más sensible que al utilizar FTA, la conservación en tarjeta permitió detectar infecciones agudas de T. cruzi en ratones y humanos. Se deben realizar ensayos clínicos de muestras para determinar su posible utilidad y performance en el diagnóstico de ChC en el contexto de la pesquisa neonatal.