EVALUACIÓN DE UN ENSAYO DE REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA EN TIEMPO REAL PARA LA DETECCIÓN DE Toxoplasma gondii

D´AMICO INDIRA; MORONI S; BISIO M; BALLERING G; MOSCATELLI G; GONZALEZ N; ALTCHEH J

Congreso; VIII Congreso de la Sociedad Argentina de Bacteriología, Micología y Parasitología Clínicas SADEBAC; 2018

Introducción: El agente causal de la toxoplasmosis (TX), Toxoplasma gondii, se transmite mediante ingestión de agua y alimentos contaminados. La primoinfección en la mujer embarazada puede infectar al feto por vía transplacentaria con severas secuelas neurológicas y lesiones oculares. El diagnóstico serológico se dificulta en recién nacidos de madres con seguimiento deficiente del embarazo por la presencia de IgG maternas en el suero del bebé. En inmunosuprimidos la TX es una urgencia infectológica, la reactivación o primoinfección puede resultar en TX severa o diseminada.El diagnóstico en estos casos es la detección directa del parásito en el órgano afectado. La PCR, por su alta sensibilidad para detectar ADN del parásito, permitiría evaluar la presencia del mismo encirculación sanguínea y otros fluidos biológicos. Ha sido propuesta como una herramienta útil para adelantar el diagnóstico de TX permitiendo la indicación del tratamiento adecuado.Objetivo: verificar un ensayo de PCR en tiempo real (PCRq) para la detección de T. gondii en fluidos biológicos previamente publicado y evaluar su utilidad para el diagnóstico de TX.Materiales y métodos: Detección de T. gondii: Extracción de ADN a partir de muestras de sangre o fluidos biológicos utilizando QIAamp mini kit (QIAGEN®). PCRq con sondas Taqman dirigida a secuencias de ADN del gen B1 de T. gondii (Lin y col. 2000) utilizando StepOne Real-Time PCR System (Applied Biosystems).Se determinó la exclusión de otros protozoos y microorganismos (sífilis, CMV, Chagas, leishmaniosis) y la inclusión de distintas cepas de T. gondii (RH y PRU). Se realizaron diluciones seriadas del parásito en sangre entera para el cálculo del límite de detección (LD) el rango reportable (RR) y eficiencia (EF) del ensayo.Posteriormente se analizaron 14 muestras de sangre con EDTA y 1 de LCR de pacientes con sospecha de TX congénita y 9 muestras de LCR y 1 biopsia de SNC de pacientes inmunosuprimidos.Resultados: Durante la puesta a punto del ensayo se determinó la concentración óptima de primers y sonda. El ensayo no detectó microorganismos causantes de síndromes clínicos similares ni otros protozoos resultando especifico para T. gondii y logró detectar los 2 genotipos ensayados. Se obtuvo un LD de 0,513 ng de ADN/uL (IC95=0,322-0,820) mediante un análisis POD/LOD, un RR =10 a 10000 eq de parásito/mL y una EF= 91,2% y R2=0,996. Se detectó el parásito en 5/10 muestras de LCR y en 1 biopsia pero no en sangre periférica.Conclusiones: La PCRq mostró alta sensibilidad analítica para detectar el parásito y adecuada especificidad analítica, similares a las reportadas en la bibliografía para ensayos dirigidos al gen B1. El ensayo fue útil paradetectar el parásito en muestras clínicas de LCR y biopsias de pacientes con sospecha de reactivación por inmunosupresión (con alta carga parasitaria). La corta duración de la parasitemia en la TX podría explicar la ausencia de detección del parásito en muestras de sangre.