La proteína chaperona Ric-3 promueve la expresión en superficie del receptor de acetilcolina neuronal alfa7

VALLÉS, A.S.; ROCCAMO, A.M.; BARRANTES, F.J

La Plata, Bs. As., Argentina

Congreso; Annual meeting Sociedad Argentina de Biofísica (SAB); 2008

Sociedad Argentina de Biofísica

Los receptores de acetilcolina (AChRs) nicotínicos de tipo a7 se encuentran ampliamente distribuidos en el sistema nervioso central y periférico y participan activamente en un sinnúmero de procesos celulares y fisiológicos. La expresión heteróloga funcional del a7-AChR en células de mamífero ha sido virtualmente imposible. Sin embargo, recientemente se ha informado que la proteína chaperona Ric-3 aumenta la expresión heteróloga del a7-AChR. En este trabajo logramos la expresión del AChR humano tipo a7 en la superficie de células SHEP1-ha7 mediante transfección constitutiva de Ric-3. Se obtuvo de tal modo la línea neuroepitelial SHEP1-ha7-Ric3,  que exhibe una robusta expresión estable del AChR humano en membrana plasmática. Tal avance ha permitido determinar algunas características farmacológicas del AChR, mediante estudios de ligazón de a-bungarotoxina radioactiva ([125I]-aBTX): 1) Kd aparente de ~55 nM; 2) Bmax de 233 fmol/mg proteína; 3) la pre-exposición a la nicotina (0-500 mM) desplaza a la [125I]-aBTX con una EC50 de ~40 microM. 4) Estudios de microscopía de epifluorescencia con Alexa-aBTX demostraron que los receptores se saturan rápidamente (~10  minutos a  4ºC) y exhiben una distribución dispersa y en acúmulos en la superficie celular. 5) Estudios de microscopía de reflexión total interna de fluorescencia (TIRF) revelaron aspectos dinámicos del AChR en superficie. 6) Finalmente la funcionalidad de los canales fue estudiada mediante la técnica electrofisiológica  de patch-clamp en la configuración “canal único” (ACh 50 microM) determinándose las características de conductancia y vida media del canal unitario.