Modificaciones de la envoltura vitelina de ovocitos de anfibios por efecto de proteasas

BARRERA, DANIEL; MUSUMECI, HUMBERTO; LLANOS, RICARDO; VALZ-GIANINET, JORGE NELSON; MICELI, DORA CRISTINA

San Miguel de Tucumán, Tucumán (Argentina)

Congreso; Vº Encuentro Nacional de Jóvenes Investigadores; 2001

FUA-FUT-UNT

Se conoce que las proteasas oviducales de anfibios producen cambios en las glicoproteínas de la matriz extracelular de los ovocitos y que estos cambios serian los responsables de la capacidad fecundante adquirida por los mismos después de atravesar el oviducto. Estudios previos indican que la porción glucidica de las glicoproteínas de la envoltura vitelina (EV) están involucrada en las primeras etapas de la fecundación, ya que cuando los espermatozoides son tratados con moléculas extraídas de la EV pierden su capacidad fecundante. Asimismo se observo, empleando EV aisladas de ovocitos celómicos y uterinos de Bufo arenarum sometidas a técnicas de conjugación con biotina y observación por microscopia de fluorescencia, que existe unión de moléculas marcadas a la membrana plasmática del espermatozoide. Considerando que la tripsina en bajas concentraciones puede estimular la acción de las proteasas oviducales, de tal forma que los ovocitos celómicos (no fecundables ) adquieren la capacidad de ser fecundados, se investigo si esta enzima es capaz de producir también modificaciones sobre envolturas aisladas. Empleando técnicas de microscopia de transmisión, se analiza la ultraestructura de la EV de ovocitos celómicos de B. arenarum (EVOC) luego del tratamiento con tripsina o fluido de PR se efectuó también un estudio electroforetico de los componentes proteicos de las EV aisladas, solubilizadas y luego tratadas con tripsina. El tratamiento de las EVOC con tripsina afecta a la proteína de 84kD la que desaparece al cabo de 180 seg de tratamiento. Además la actividad de tripsina se manifiesta modificando los componentes con peso molecular entre 30 kD y 41 kD, dando como resultado un perfil electroforetico similar al de las EV de ovocitos uterinos. Las imágenes al microscópio electrónico de ovocitos celómicos tratados con tripsina 0.001% muestran que al cabo de 60 segundos presenta modificaciones en los fascículos de fibrillas horizontales, con dispersión de los mismos y desaparición de los espacios característicos. Los fascículos perpendiculares a la superficie, aunque están presentes, se observan mas difusos y con menor grado de interacción con los fascículos horizontales. Es importante señalar que la cara interna de la envoltura muestra marcadas modificaciones luego del tratamiento con tripsina, desapareciendo la trama reticular y adquiriendo un aspecto difuso.