Interacción del Espermatozoide con Proteínas de la matriz extracelular del ovocito de anfibios

BARRERA, DANIEL; MUSUMECI, HUMBERTO; LLANOS, RICARDO JAVIER; VALZ-GIANINET, JORGE NELSON; MICELI, DORA CRISTINA

Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia-UNT

Jornada; IIIº Jornadas Científicas y Encuentro de Jóvenes Investigadores “A. Palavecino”; 2002

Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia-UNT

Se conoce que proteasas presentes en el oviducto de anfibios producen cambios en las glicoproteínas de la envoltura vitelina (EV) de los ovocitos. La transformación tanto estructural como bioquímica de la EV ocurre mientras el ovocito atraviesa el oviducto. transformando un ovocito en estado no-fecundable en uno fecundable. Posteriormente, durante la activación del ovocito, la EV se hace nuevamente impenetrable a los espermatozoides. Resultados previos mostraron que tanto la(s) proteasa(s) presentes en la secreción de la primera porción del oviducto son capaces de modificar in vitro las glicoproteínas de las EV de ovocitos celómicos recientemente ovulados y que aun no atravesaron el oviducto. Se produce la proteolisis de las glicoproteínas gp84 y gp55 y se altera la concentración de gp45 y de gp39. Esto produce un patrón electroforético diferente y característico del ovocito depuesto, o sea que ya ha atravesado el oviducto. En este trabajo se analiza si la interacción del espermatozoide con la EV manifiesta relación con las transformaciones ocurridas por la acción de proteasas. Las EV de ovocitos celómicos y depuestos fueron aisladas y disueltas por calor. Las glicoproteínas solubilizadas de las envolturas de ambos tipos de ovocitos fueron conjugadas a Biotina e incubadas con espermatozoides de Bufo arenarum y de Bufo paracnemis para estudiar adhesión homóloga y heteróloga. La presencia de proteínas biotiniladas fue revelada mediante Extravidina-FITC y la señal amplificada fue observada con un microscopio Olympus BX40 provisto de un sistema de documentación de imágenes (Gel-Doc 1000, Bio Rad). Los ensayos de adhesión mostraron que los espermatozoides de B. arenarum no interaccionan con las glicoproteínas de envolturas de ovocitos celómicos. Sin embargo cuando los espermatozoides se incubaron con las EV de ovocitos uterinos se observo intensa marca en la superficie espermática, preferentemente en la porción anterior de la cabeza. Por otra parte los espermatozoides de B. paracnemis no revelaron unión de las glicoproteínas de EV de ovocitos celómicos ni de ovocitos depuestos de B.a. Estos resultados indican que el oviducto actúa regulando la fisiología del ovocito, por cuanto indican que por efecto de las modificaciones bioquímicas y estructurales se exponen dominios capaces de interaccionar con el espermatozoide. Demostramos además que la EV de B. Arenarum interacciona específicamente con el espermatozoide de la misma especie. confirmando que una de las barreras para la fecundación inter especies se encuentra en la matriz extracelular del ovocito.