Adhesión del espermatozoide con la envoltura vitelina de ovocitos de Bufo arenarum. Influencia de serino proteasas en la interacción espermatozoide- ovocito.

LLANOS, RICARDO JAVIER; BARRERA, DANIEL; VALZ-GIANINET, JORGE NELSON; MICELI, DORA CRISTINA

Tafi del Valle, Tucumán (Argentina)

Jornada; XX Jornadas Científicas de la Asociación de Biología de Tucumán; 2003

Asciación de Biología de Tucumán

La EV  de los ovocitos del anfibio Bufo arenarum sufren modificaciones durante su tránsito por el oviducto. Esta transformación, que se manifiesta a nivel bioquímico y estructural, es producida por una proteasa presente en el fluido oviductal, secertada esoecíficamente por la primera proción del oviducto denominada pars recta (PR). Esta proteasas es capaz de digerir parcialmente la EV  del los ovocitos celómicos convirtiendo su estado funcional: de un ovocito no fecundable a uno fecundable. Estudios previos mostraron que la acción de la proteasa de PR produce la transformación del patrón electroforético y de la ultraestructura de la EV de los ovocitods celómicos adquiriendo las carateríscticas protpias de la EV de los ovocitos depuestos tanto en lo referente a movilidad relativa de las glicoproteinas constitutivas en SDS-PAGE como ala ultraestructura.Nuestros resultados pusieron en evidencias diferencias sustanciales en la adhesión del espermatoxzoide a la EV de los ovocitos depuestos respecto a la EV de los ovocitos celómicos. En el presenta trabajo se analiza como es la interacción de los espermatozoides con glicoproteinas constitutivas de la EV de los ovocitos celómicos digeridos por métodos in vitro usando como serino proteasa la tripsina. Ovocitos celómicos fueron incubados con tripsisna 0.001% y luego sus EV fueros extraídas, solubilizadas y conjugadas a biotina. Las glicoproteinas conjugadas fueron empleadas en ensayos de adhesión con espermatozoides homólogos. La presencia de las proteínas adheridas a los espermatozoides fueron visulaizadas mediante extrevidina -FITC y la señal amplificada fue observada en un microscopio Olympus BX 40 provisto de un sistema de documentación de imágenes (Gel-Doc 1000, Bio Rad). Los ensayos de adhesión mostarron que los espermatozoides no interacciónan con las glicoproteinas de la EV de ovocitos celómicos, pero si lo hacen con las glicoproteinas provenientes de EV disueltas de ovocitos celómicos incubados con tripsisna 0,001%. Es este caso las proteinas de la EV se localizan preferencialmente en le región del acrosoma del espermatozoide. Estos resultados indican que in vitro se pueden mimetizar condiciones de microambiente oviducal usando tripsina en lugar de proteasa de PR. Se hipotetiza que la proteólisis de los componentes de la EV habilitaria dominios de adhesión para el espermatozoide presente en la EV y que antes del paso del ovocito por el oviducto (ovocuito no fecundable) se encuentran inaccesibles para el gameto masculino.