Estudio de un componente de la envoltura vitelina del ovocito de B.arenarum (gp39) y su relación con proteínas de la Zona Pelucida

GARCÍA, VANESA; BARRERA, DANIEL; LLANOS, RICARDO JAVIER; MICELI, DORA CRISTINA

San Miguel de Tucumán, Tucumán

Jornada; VII Jornadas Científicas y Encuentro de Jóvenes Investigadores “Augusto Palavecino”. UNT – FBQF; 2006

Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia

En los anfibios anuros, la envoltura vitelina (EV) que rodea al ovocito cumple un rol importante en las 1º etapas del proceso de fecundación. Los ovocitos recientemente ovulados y obtenidos de la cavidad celómica (OC) no pueden ser fecundados por los espermatozoides. La acción de una proteasa durante el pasaje a traves del oviducto genera cambios morfológicos y bioquímicos sobre la EV, posibilitando que el ovocito adquiera un estado fecundable. En la especie Bufo arenarum (B. a.) se caracterizaron previamente mediante SDS-PAGE los componentes glicoproteicos de la envoltura del OC como gp 122, 84, 82, 55, 48, 42, 39 Y 34 kDa; de acuerdo a sus masas moleculares relativas. Los cambios generados en el oviducto implican la proteolisis y disminución de las concentraciones relativas de gp 84 y 55 de la envoltura del OC,como así también modificaciones en las cantidades de gp 48, 42 y un incremento de 2.3 veces de la cantidad de gp 39 en la EV del ovocito luego de atravesar el oviducto. Los objetivos de este trabajo fueron conocer la identidad de gp39, y analizar la especificidad de un anticuerpo (AB) contra esta glicoproteína producido en nuestro laboratorio, contra esta proteína. Se determinó la secuencia de tres péptidos internos de gp39 obtenidos de la digestión con tripsina de dicha gp. El análisis bioinformático reveló que estos péptidos tienen un 100% de identidad con regiones de una secuencia deducida a partir de un ADNc obtenido de ovario de B. a.; homólogo al componente ZPC de Zona Pelucida. La especificidad del AB se examinó mediante la técnica de Western blot. Estos ensayos demostraron que el AB reconoce específicamente a gp39 de la EV del OD , y reacciona con gp55, 48 y 42 de la EV del OC. Se corroboró la reactividad del AB por inmunohistoquímica sobre cotes de ovocitos de ovario, celómicos y depuestos. Los resultados mostraron la posiblerealción entre gp39 y ZPC; por lo que el AB analizado será una herramienta de valor para la realización de ensayos biológicos con el propósito de determinar la participación de gp39 en la interacción gamética.