Estudio de la implicancia funcional del ácido fólico sobre las células del oviducto desde un enfoque molecular

MANSILLA, MARIANO J.; GARCÍA, E. VANESA; BARRERA, ANTONIO D.

San Miguel de Tucumán, Tucumán.

Jornada; XX Jornadas Científicas y Encuentro de Jóvenes Investigadores Augusto E. Palavecino; 2019

Introducción: El folato es necesario para el establecimiento de marcas de metilación del ADN, las cuales modulan los niveles de expresión génica en las células. Si bien existen numerosos estudios del efecto de este micronutriente durante el período gestacional intrauterino, su implicancia funcional en el contexto del oviducto aún se desconoce. En estudios previos demostramos que el folato no sólo está presente en el medio intraoviductal sino que además las células de su epitelio expresan receptores y transportadores que le permitirían internalizar este micronutriente. Objetivos: A fin de conocer la implicancia del folato en las células epiteliales del oviducto bovino (BOECs) nos propusimos evaluar como impactan diferentes concentraciones extracelulares de ácido fólico (AF, forma sintética de folato) sobre los niveles de expresión génica y la integridad de membrana de las BOECs. Materiales y métodos: Cultivos en suspensión de BOECs del ámpula y del istmo se incubaron en presencia de AF en concentración baja (20 nM), fisiológica (1 µM), elevada (10 µM) y suprafisiológica (100 µM) en medio TCM-199 a 38,5 °C y 5% CO2 durante 24 h. Posteriormente las BOECs fueron procesadas para analizar mediante RT-qPCR la expresión de genes implicados en el transporte de folato (FOLR1, FOLR2, FOLR3, SLC19A1, SLC46A1), la metilación del ADN (DNMT1, DNMT3A, DNMT3B) y la señalización intracelular en respuesta a nutrientes (MTOR). Se evaluó además la integridad de la membrana celular midiendo la actividad de la enzima citoplasmática LDH en el medio de cultivo. Resultados: La adición al medio de una concentración de AF similar a la oviductal (1 µM) indujo solamente el incremento transcripcional de FOLR1 y FOLR3 en las BOECs de ámpula e istmo, respectivamente. Además, las BOECs cultivadas con concentraciones elevadas de AF (10 µM) presentaron un incremento en los niveles de expresión de FOLR1, FOLR2, FOLR3, SLC19A1, DNMT1 y DNMT3A. En contraste, concentraciones suprafisiológicas de AF (100 µM) provocaron una disminución en los niveles de expresión de la mayoría de los genes analizados. Adicionalmente, se detectaron bajos niveles de actividad de LDH en el medio de cultivo de los diferentes grupos experimentales, indicando que la adición de AF no produjo alteración de las funciones celulares básicas que conlleven a un daño celular. Conclusiones: Los niveles extracelulares de AF promueven cambios en la expresión génica de las BOECs y las mismas pueden tolerar elevados niveles de AF. Estos resultados proporcionan nuevas perspectivas acerca del rol del folato en el microambiente materno.