Estrategias biotecnológicas para favorecer la maduración in vitro y la calidad de complejos cúmulo-ovocitos bovinos

GÓMEZ, PAULA; GARCÍA, E. VANESA; BARRERA, ANTONIO D.; ROLDÁN OLARTE, MARIELA

San Miguel de Tucumán, Tucumán.

Jornada; XX Jornadas Científicas y Encuentro de Jóvenes Investigadores Augusto E. Palavecino; 2019

En el área de la biotecnología de la reproducción, existe gran interés en optimizar las condiciones de cultivo para obtener ovocitos competentes que produzcan in vitro embriones de alta calidad. In vivo, el ovocito bovino madura por acción de las gonadotrofinas, pero su completa maduración depende también de diversos factores de crecimiento. Nuestra hipótesis sostiene que la suplementación de los medios de maduración in vitro (MIV) con moléculas presentes en el tracto materno puede mejorar la calidad de los ovocitos y favorecer la producción in vitro de embriones. Las estrategias utilizadas fueron suplementar el medio de MIV con dos factores de crecimiento, estudiados en nuestro laboratorio, e implementar técnicas de biología molecular para evaluar la expresión de genes en las células del cúmulo (CC) que acompañan al ovocito. El objetivo fue evaluar el efecto de los factores de crecimiento VEGF-D y BMP-5 incluidos en el medio de MIV, sobre la calidad de los complejos cúmulo-ovocito (COCs) bovinos, analizando la expresión génica de CC y relacionarlos con el índice de expansión y porcentaje de maduración nuclear. Los COCs inmaduros se obtuvieron por aspiración de folículos ováricos de vaquillonas faenadas y se maduraron in vitro en tres grupos: control, BMP-5 10 ng/ml y VEGF-D 100 ng/ml. Luego de 22 h de MIV, se disgregaron las CC y se recuperaron las mismas de cada tratamiento. Mediante RT-PCR se evaluó la expresión de genes relacionados con síntesis de ácido hialurónico, (HAS-2), uniones celulares (GJA), estrés oxidativo (SOD-2), proliferación celular (CCNB1) y apoptosis (BCL2 y BAX). Se observó un incremento en los niveles de expresión de HAS-2 y SOD-2 con VEGF-D, mientras que en presencia de BMP-5 disminuyó la expresión de GJA. Además, se detectó que ambos factores inducen un incremento de CCNB1 y BCL2 y una disminución de BAX. Aunque no se detectaron diferencias significativas en el grado de expansión de los COCs, tanto VEGF-D como BMP-5 aumentaron los porcentajes de maduración nuclear. En conclusión, el agregado de los factores VEGF-D y BMP-5 al medio de MIV aumenta los índices de ovocitos madurados in vitro, y favorece la expresión de genes necesarios para la competencia ovocitaria reflejando la importancia que tiene incorporar factores del microambiente materno a los medios de cultivo in vitro.