INVESTIGADORES
BARRERA Antonio Daniel
congresos y reuniones científicas
Título:
AISLAMIENTO DE VESÍCULAS EXTRACELULARES DE ORIGEN OVIDUCTAL Y SU CARACTERIZACIÓN POR MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA DE TRANSMISIÓN ACOPLADA A TINCIÓN NEGATIVA
Autor/es:
GARCÍA, E. VANESA; BARRERA, ANTONIO D.; MICELI, DORA C.; FURNUS, CECILIA
Lugar:
Tafí del Valle, Tucumán.
Reunión:
Jornada; XXXV Jornadas Científicas de la Asociación de Biología de Tucumán; 2018
Institución organizadora:
Asociación de Biología de Tucumán (ABT).
Resumen:
Las vesículas extracelulares (VEs) son pequeñas vesículas de membrana capaces de trasladar diferentes biomoléculas (proteínas, lípidos, ADN, ARNm, miARN) y actúan como importantes mediadores de la comunicación celular. Dada la presencia de VEs en los fluidos reproductivos, se ha propuesto que las mismas cumplirían un rol fundamental durante la comunicación materno-embrionaria. Teniendo en cuenta que el oviducto provee el primer microambiente materno en establecer un diálogo temprano con el embrión, el objetivo de este trabajo fue poner a punto la obtención de VEs a partir de muestras de fluido oviductal bovino (FO) y realizar su caracterización mediante microscopía electrónica de transmisión (MET). Se obtuvieron oviductos bovinos en estadio post-ovulatorio (n=10) y los mismos fueron perfundidos con PBS estéril para la obtención del FO. Las muestras de FO fueron sometidas a una centrifugación diferencial (400x g, 10min/2.000x g, 10min/10.000x g, 1h) y a dos etapas de ultracentrifugación (100.000x g, 1h) a 4ºC y el pellet de VEs obtenido fue resuspendido en PBS estéril. Una alícuota del mismo fue fijada en paraformaldehído 2% y se llevó a cabo un protocolo de tinción negativa para su observación por MET. Como resultado se confirmó la presencia de VEs en el FO, presentando la característica forma de ?copa?. El análisis morfométrico reveló una población de VEs de 50-100nm correspondiente a la categoría de exosomas y en menor proporción una población de VEs>100nm coincidente con la categoría de microvesículas. A partir de estos resultados se proyectan nuevos estudios a fin de evaluar la composición y acción de estas VEs en el oviducto durante el desarrollo embrionario temprano.
