Suplementación temprana de BMP5 al medio de cultivo embrionario y su efecto en el desarrollo in vitro y la expresión de genes de embriones bovinos

GARCÍA, E. VANESA; RIZO, GABRIELA; VALDECANTOS, PABLO A.; MICELI, DORA C.; BARRERA DANIEL

Buenos Aires

Congreso; 2º Congreso Internacional de la Sociedad Argentina de Tecnologías Embrionaria (SATE); 2014

Sociedad Argentina de Tecnologías Embrionaria (SATE)

Las moléculas oviductales juegan un rol clave en la comunicación materno-embrionaria. En estudios previos demostramos que la proteína morfogenética ósea 5 (BMP5) se expresa diferencialmente en la región del istmo del oviducto bovino y está presente en el fluido oviductal (García y col. 2014, Theriogenology, 81: 1032-41). Sin embargo, se desconoce la acción de este factor durante el desarrollo embrionario temprano. El objetivo de este trabajo fue incorporar BMP5 durante las primeras etapas del cultivo in vitro de embriones bovinos y evaluar su efecto a nivel del desarrollo y de la expresión de genes asociados a la vía de BMPs (ID2) e implicados en el desarrollo embrionario [OCT4, NANOG, SOX2 (pluripotencia) y DNMT1, DNMT3A, DNMT3B (metilación del ADN)]. Ovocitos bovinos, obtenidos de ovarios provenientes de frigorífico, fueron madurados y fecundados in vitro. Los presuntos cigotos se cultivaron en medio CR1aa libre de suero (38,5 °C, 5% CO2) bajo 3 tratamientos: I) sin suplementación; II) suplementado con el vehículo de disolución del factor (HCl 0,04 mM) y III) suplementado con BMP5 (100 ng/ml). A las 48 hpi se evaluó la tasa de clivaje y los embriones se transfirieron a medio CR1aa + 10% SFB para continuar el cultivo. En los días 7 y 8 pi se registró el número de blastocistos desarrollados. Pooles de embriones de 2, 4, 8 células y blastocistos derivados del cultivo inicial en ausencia y presencia de BMP5 fueron colectados para el posterior análisis de la expresión de genes mediante RT-qPCR. Los datos de desarrollo se analizaron estadísticamente por el test de Fisher (P