ESTUDIOS POR PROTEÓMICA DEL MODO DE ACCIÓN DE DROGAS ANTI-CHAGÁSICAS.

TROCHINE A; FARAL-TELLO P; ROBELLO C

Piriapolis

Jornada; XIII Jornadas de la Sociedad Uruguaya de Biociencias; 2010

Sociedad Uruguaya de Biociencias (SUB)

El presente trabajo se enmarca en un proyecto general de desarrollo de nuevas herramientas para el control de enfermedades infecciosas provocadas por parásitos de la familia Trypanosomatidae, que pretende la identificación de nuevos derivados de nucleobases para su uso como drogas anti-parasitarias. Como parte de este proyecto, en nuestro laboratorio se estudiarán las bases moleculares de la toxicidad, es decir el modo de acción, de los compuestos derivados de nucleobases que muestren actividad contra los parásitos. Los estudios de modo de acción se llevarán a cabo principalmente por proteómica y por microarreglos de ADN, a partir de muestras de parásitos tratados y sin tratar. En esta primera etapa del proyecto se están poniendo a punto las condiciones de trabajo utilizando algunas de las drogas con las que se tratan estas enfermedades,lo que además representa un aporte original ya que en la mayoría de los casos su modo de acción no está completamente elucidado. Hasta el momento se compararon los perfiles proteicos bidimensionales de epimastigotes de Trypanosoma cruzi, utilizando extractos totales de parásitos tratados y sin tratar con la droga Nifurtimox. Se utilizaron geles entre 12-15% de poliacrilamida, con rangos de separación de pH entre 4-7 para el isoelectroenfoque, y posterior revelado por tinción con Plata. De esta manera se hallaron un número de spots diferenciales, algunos de los cuales se identificaron por espectrometría de masa utilizando un MALDI-TOF/TOF 4800 (Applied BioSystems). A su vez se están analizando los perfiles proteicos diferenciales de epimastigotes de T. cruzi tratados con la droga anti-chagásica benznidazole. En todos los casos se tuvo en cuenta de seleccionar tratamientos con los compuestos que no provocaran el inicio de la muerte celular, lo que podría modificar los perfiles proteicos de manera droga no-específica. Paraesto se midieron los porcentajes de parásitos annexina V positivos luego del tratamiento, y su viabilidad con curvas de crecimiento post-tratamiento.