Estudio de la esporulación y la sensibilidad a factores luminales intestinales en Clostridium difficile

PAOLA CECILIA SOLDAVINI PELICHOTTI; FERNANDO M. TREJO; PABLO F. PÉREZ

CABA

Congreso; VIII Congreso de la Sociedad Argentina de Bacteriología, Micología y Parasitología Clínica (SADEBAC); 2018

provocando desde diarreas hasta colitis pseudomembranosa, asociadoprincipalmente a las toxinas A y B producidas por las células vegetativas. Lasesporas son su forma de diseminación y contagio. En el hospedador, C. difficile se encuentra con factoresluminales tales como sales biliares, cuyo efecto sobre la bacteria serdeterminante en la infección. El objetivo del este trabajo fue estudiar laesporulación y el crecimiento de C.difficile en presencia de ácido ursodeoxicólico (UDCA) o bilis de buey.Se evaluaron tres aislamientos clínicos locales ALCD3, GCD2 y GCD4 y lacepa de referencia VPI 10463. Efecto desales biliares: C. difficile fueinoculado en BHI en presencia o no de diferentes concentraciones de bilis oUDCA e incubadas en anaerobiosis a 37°C. El desarrollo de los cultivos se evaluópor medida de DO (600nm) a las 22 h. Esporulación:se evaluó por microscopia óptica a partir de cultivos de C. difficile en DCM a diferentes tiempos de crecimiento,observándose esporos oscuro (O), brillantes (B) y libres (L). El resultado se expresócomo relación (R) de forma evaluada/formas totales (ej. RO para esporososcuros). Termorresistencia porrecuento en DCM-agar-tauroclato de sodio (0.1% p/v), de suspensiones bacterianassin tratar o tratadas térmicamente (20 min. a 65ºC).El resultado se expresó como TR: relación formas termo-resistentes/formastotales. El crecimiento de C. difficile(DO a 22 h de incubación) fue inhibido significativamente respecto al control, enun 36% (ALCD3 y GCD2), 65% (VPI 10463) y 92% (GCD4) en por UDCA 1 mM. Para todas las cepas lainhibición fluctuó entre 90-95% con UDCA 4 mM. En presencia de bilis, al 0.1% p/v, elcrecimiento fue inhibido significativamente respecto al control en un 56%(ALCD3) y 60% (GCD2). A concentración de 2% p/v, la inhibición fue de 38%(ALCD3) y 96% (GCD2).Las cepas mostraron tener parámetros de crecimiento similares entre sí,con tiempos de duplicación de 1 h y latencia entre 1 y 4 h, llegando a faseestacionaria entre las 10-12 h. A 24 h de crecimiento se detectaron formasesporuladas en estadíos tempranos (O) con RO: 0,25 (VPI 10463), 0,70 (ALCD3) y 0,83(GCD4). La cepa ALCD3 además presentó formas brillantes RB: 0,25. A los 7 días,se detectaron RL: 0,02 (VPI 10463), RL: 0,80 (ALCD3), RL: 0,79 (GCD2) y RL:0,14(GCD4). Luego de 24 h de crecimiento se observaron diferencias en TR, convalores de 0,27 (ALCD3), 0,07 (GCD4), <10-3 (GCD2) y <10-4(VPI10463). En cultivos de 7 días, los valores de TR fueron cercanos a 1 paratodas las cepas evaluadas. Las cepas de C. difficileevaluadas, presentaron diferencias en su capacidad de esporular y deinteraccionar con factores luminales presentes en el intestino. Se detectóefecto dosis-dependiente del UDCA y la bilis. Estos resultados podrían serrelevantes en relación a la severidad de la infección, la forma de diseminacióny el desarrollo de posibles re-infecciones.