INHIBICIÓN DE LA ACTIVIDAD BIOLÓGICA DE CLOSTRIDIUM DIFFICILE POR BIFIDOBACTERIAS Y LACTOBACILOS

TREJO FM., PÉREZ PF. Y DE ANTONI GL

Córdoba-Argentina

Congreso; XI Congreso Argentino de Microbiología. Asociación Argentina de Microbiología.; 2007

Clostridium difficile, principal agente etiológico de diarreas asociadas a antibióticos, es capaz de colonizar el intestino de pacientes hospitalizados tratados con antibióticos (Clindamicina) y producir sus toxinas (TcdA enterotoxina, TcdB citotoxina) provocando diarreas y casos colitis pseudomembranosas. El tratamiento implica la administración oral de vancomicina y metronidazol. Tratamientos alternativos emplean probióticos tales como S. boulardii, Lb. rhamnosus GG, B longum y Enterococcus faecium SF68, pero poco es lo que se sabe sobre los mecanismos que inhiben  la patogénia de Clostridium difficile. Se evaluó la capacidad de Bifidobacterium y Lactobacillus (colección CIDCA)de inhibir la actividad citotóxica (AC) de sobrenadantes (SN) de Clostridium difficile (cepa ATCC 9689, aislado clínico 117 Hospital de Infecciosas F Muniz). La AC se evaluó sobre células Vero en cultivo. Las células que permanecieron adheridas se tiñeron y se midió el color en espectrofotómetro. Bifidobacterium y Lactobacillus se crecieron junto con Clostridium difficile en caldo BHI 20hs a 37C en condiciones anaeróbicas (co cultivo CC). Se determino la AC de los SN. Se realizaron ensayos para determinar los factores involucrados en inhibición de la AC i) crecimiento de C difficile en presencia de SN de Bifidobacterium y Lactobacillus, ii) actividad citopática de SN de C difficile en presencia de SN de Bifidobacterium y Lactobacillus, iii) pre incubación de SN de clostridio con bifidobacteria y lactobacilos (DO600 1) , iv) crecimiento de clostridio en presencia de lactobacilos y bifidobacterias muertas por UV. Se evaluó la producción de toxinas mediante técnicas inmunológicas con mAb contra TcdA y TcdB. Ciertas cepas de Bifidobacterium y Lactobacillus (538, 5325, 5310 y 83114) inhiben la AC de Clostridium difficile en CC. Dicho efecto no se debió a la inhibición en el crecimiento de C difficile ni se manifestó al crecer este en presencia de los SN de Bifidobacterium o Lactobacillus. Los SN de la cepa 5310 presentaron una inhibición parcial de la actividad citopática contra la cepa 117 de clostrido. Bifidobacterium y Lactobacillus tratados por UV no produjeron inhibición en la AC en el CC. La incubación de los SN con las bacterias no inhibió la AC. Durante el CC la producción de toxinas se ve disminuida. Durante el CC con C. difficile, ciertas cepas de Bifidobacerium y Lactobacillus inhiben la producción de toxinas no así su crecimiento. Dicha inhibición solo es posible cuando Bifidobacterium y Lactobacillus se encuentran viables. No es existe una interacción de C difficile con SN de Bifidobacterium o Lactobacillus que explique dicho efecto. Tampoco existe una interacción toxina superficie bacterial. Estos resultados ayudarán a una mejor comprensión en los mecanismos involucrados en la inhibición de Clostridium difficile por ciertos patógenos.