Estudio de la acción de Lactobacillus kefiri cepa CIDCA 8321 en la formación de biopelículas de cepas de Salmonella.

MERINO LINA; F. M. TREJO,; GOLOWCZYC MARINA; DE ANTONI G. L

Congreso; XXII Congreso Latinoamericano de Microbiología y XIV Congreso Argentino de Microbiología; 2016

Estudio de la acciónde Lactobacilluskefiri cepa CIDCA 8321 en laformación de biopelículas de cepas de SalmonellaMerino Lina,Trejo Fernando, De Antoni Graciela, Golowczyc MarinaCentro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos (CIDCA)(Conicet La Plata,UNLP), La Plata,Argentina.merinolina39@gmail.com Las biopelículas (biofilms) de microorganismos son estructuras complejas formadas por uno o más tipos de microorganismosque desarrollan asociados a una superficie. Se caracteriza por la excreción deuna matriz polimérica que le confiere a lasbacterias capacidad de persistir en el ambiente y tener mayor resistencia aagentes antimicrobianos. Algunos microorganismos patógenos como Salmonella pueden formar estasestructuras, donde propiedades superficiales tales como hidrofobicidad oagregación pueden ser factores relevantes. El primer paso de su formación se rigeprincipalmente por interacciones fisicoquímicas con la superficie y propiedadessuperficiales de la bacteria. [F1] Los probióticos pueden serutilizados como una estrategia de control de los biofilms desarrollados por Salmonella,un patógeno asociado a numerosas enfermedades y contaminaciones. Los objetivos deeste trabajo fueron 1) investigar la capacidad de formación de biofilm de 13 cepas de Salmonella entérica serovariedadesTiphymurium, Gallinarum y Enteritidis y 2) estudiar la acción de Lactobacillus kefiri cepa CIDCA 8321 sobreel desarrollo del biofilm de Salmonella.Se determinaron las propiedades de superficiede las cepas de Salmonella medianteensayos de hidrofobicidad con hexadecano (método MATH), y de auto- agregación yco- agregación con el lactobacilo mediante cinética de caída de absorbancia a600 nm. Se evaluó la formación de biofilmpor cristal violeta (CV) y microscopía confocal. Para ello se crecieron  las cepas de Salmonella en medio LB en placas de policarbonato de 24 pocillos durante24 hs a 37 ºC.Posteriormente los biofilm fueronlavados y teñidos con solución de CV durante 20 min. El colorante se extrajocon etanol y se midió la absorbancia a 595 nm. Para estudiar la estructura, losbiofilms fueron obtenidos por crecimiento sobre discos Thermanox manteniendo lasmismas condiciones de ensayo mencionadas. Luego fueron teñidos con yoduro depropidio y SYTO 9, que además permite distinguir células vivas y muertas.Se observó que de las cepas de Salmonella entérica evaluadas, dos serovariedadEnteritidis (CIDCA 101 y 105), una serovariedad Typhimurium (CIDCA102) y una serovariedad Gallinarum (CIDCA 109)tienen una alta capacidad de formar biofilmcon valores de absorbancia mayores a 0,75, a diferencia del resto de las cepasdonde la absorbancia está por debajo. Además se observó que L. kefiri CIDCA 8321 disminuye laformación de biofilm de estas cepas (concentración de cultivo  de lactobacilos 2*10⁸y 4*10⁷ ufc/ml (1/5)) [M2] y[F3]  este efecto se ve aumentado enpresencia de una mayor concentración de lactobacilos. Por microscopía seobservó que la cepa de Salmonella CIDCA105 forma estructuras tipo clustersque no se observan para la cepa CIDCA 101, mientras que en presencia del  lactobacilo estas formaciones están ausentes. Las cepas de Salmonella estudiadas son hidrofílicas y no autoagregan luego de 1hora. L. kefir CIDCA 8321 es una cepaaltamente hidrofóbica y tiene capacidad de co-agregar con Salmonella CIDCA 101, 102, 105 y 109. Esta interacción podría serla causa de la disminución de la formación de biofilm por parte de estas cepas de Salmonella.