Detección de diferentes toxinotipos circulantes de Clostridium difficile en un centro de salud mediante análisis de polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción (RFLP).

TREJO FM; CRIVARO ANDREA; SALTO ILEANA; MAGARIÑOS F; ARREGUI L; ALUL E; FACENTE A; PÈREZ PF

Congreso; XXII Congreso Latinoamericano de Microbiología y XIV Congreso Argentino de Microbiología; 2016

Detección dediferentes toxinotipos circulantes de Clostridiumdifficile en un centro de salud mediante análisis de polimorfismo delongitud de fragmentos de restricción (RFLP).FM Trejo1, A Crivaro2, PCarasi2, I Salto2, F Magariños3, LArregui3, E Alul3, A Facente3, PFPèrez1 2 1 CIDCA-UNLP-CONICET CCT La Plata,Argentina. 2 Cátedra de Microbiología, FCE UNLP, Buenos Aires, Argentina. 3HIGA Gandulfo, Lomas de Zamora, Buenos Aires, Argentina Clostridiumdifficile (CD) es unanaerobio esporulado, responsable de 15-25 % de las diarreas asociadas al usode antibióticos. Como factores de virulencia destacan las toxinas A (TcdA), B(TcdB) y binaria (con dos componentes CDTA y CDTB). Los genes que codificanTcdA y TcdB, junto con tres genes complementarios (tcdE, tcdR y tcdC), se encuentran en un locus de patogenicidad (PaLoc)cromosomal de 19.6 kb. La ausencia del PaLoc caracteriza las cepas incapaces deproducir TcdA y TcdB. En los últimos años se han detectado cepas con mayorvirulencia que en comparación con la cepa de referencia VPI10463, presentanvariaciones de secuencia en genes tcdA, tcdB y complementarios. Estas variaciones genéticas permiten la clasificaciónen diferentes toxinotipos. El objetivo de este trabajo fue determinar siexisten diferentes toxinotipos de CD circulando en un mismo centro de saludpúblico. Para ello, se evaluaron aislamientos de CD provenientes de pacientesinternados con sintomatología e historia clínica compatible con infección porCD. Se estudiaron 6 aislamientos provenientes de materia fecal analizadaspreviamente mediante kits comerciales que detectan toxinas A y B o el antígenocomún (glutamato deshidrogenasa) que detecta la presencia de la bacteria. Lascepas de C. difficile provinieronde muestras que fueron positivas para al menos una de estas características. Mediantetécnica de PCR convencional con primers para los genes tcdA,tcdB, cdtA o cdtB se caracterizaron los aislamientos en estudio. Lascepas que carecen del PaLoc (tox-), muestran amplificación con primersespecíficos lo cual no ocurre en cepas que lo contienen (potencialmentetoxigénicas). Para la toxinotipificación por RFLP,  se utilizaron losprimers B1 contenido en tcdB y A3 contenido en tcdA (diferentes a los empleados en la PCR convencional). Los productosfueron digeridos con Hinc y Acc para B1 y EcoRI para A3. Como referencia seempleó la cepa VPI10463 (hiperproductora de toxinas, toxinotipo 0). El análisispor PCR convencional mostró la presencia de dos tipos de perfilesgenéticos:  tcdA- /tcdB- /cdtA-/ cdtB- (3 cepas) y tcdA+ / tcdB+ / cdtA- / cdtB- (3cepas). La toxinotipificación por RFLP evidenció que en las cepas estudiadas sedetectan los toxinotipos VIII y 0, II ó XIII (aún no resuelto). Se destacatambién, la presencia de aislamientos tox(-) que son reactivos con los ensayoscomerciales de detección. Los resultados demuestran que en el ámbito  delHIGA Gandulfo, circulan cepas de C. difficile con variabilidad genética en genes de virulencia. Estopodría relacionarse con la internación de pacientes de diferentes regiones.Teniendo en cuenta que ciertos toxinotipos de C. difficile se asocian a cepas hipervirulentas, un estudio queincluya más aislamientos y otros centros de salud permitirá obtener datosepidemiológicos sobre las infecciones por C. difficile, permitiendo detectar los principales toxinotiposcirculantes y contribuir al control de la enfermedad.