Caracterización de epitopes crípticos y de los Ac que los reconocen

LOUREIRO ME; MARINO VJ; MATHIEU PA; ROGUIN LP; PEÑA C; RETEGUI LA

Mar del Plata

Congreso; Congreso Conjunto de Sociedades Biomédicas; 2004

SAIC-SAI-SAFE-SABiofísica-SABiología-SAN-SAF

Los epitopes crípticos son aquellos que se exponen cuando el antígeno (Ag) es alterado por alguna condición física o química. Hemos demostrado previamente que en ciertas condiciones experimentales la proporción de anticuerpos (Ab) dirigidos contra dichos epitopes puede ser mayor que la de los Ab dirigidos contra los epitopes nativos. En este trabajo estudiamos sueros que contienen proporciones elevadas de Ab contra epitopes que se exponen en la hormona de creciemiento humana (hGH) y ovina (oGH) insolubilizadas en una superficie plástica; como controles se utilizaron Ab monoclonales (MAb) abti-hGH. Se realizaron ensayos de ELISA de competición a diferentes temperaturas (4, 37 y 56ºC), pH (5.0, 7.4 y 9.0) y fuerza iónica (0, 0.15 y 0.6 M NaCl). Los resultados indicaron que en ninguna de esas condiciones experimentales variaba la proporción de los epitopes crípticos reconocidos por los Ab, tanto poli como monoclonales. Sin embargo, la temperatura elevada (56ºC) no afectó el comportamiento de los MAb anti epitopes crípticos pero disminuyó significativamente la afinidad de los Ab policlonales. Para caracterizar los epitopes crípticos expuerstos por la hGH y la oGH se utilizaron varios péptidos sintéticos que cubren la secuencias 19-128 de la hGH y 94-131 de la oGH, y un fragmento de oGH denominado AB, que contiene la secuencia 6-124 unida a la 150-179.Se observo que ninguno de los péptidos sintéticos fue reconocido por los Ab anti hGH o anti oGH, mientras que el péptido AB se comportó en forma similar a la oGH. Resultados similares se hallaron al utilizar la hGH digerida con tripsina: los Ab sólo se unieron a las muestras en las que se conservaban fragmentos de peso molecular cercanos a 12000. Los epitopes crípticos de hGH  y oGH no serían secuencias lineales sino conformaciones que se exponen cuando las hormonas están insolubilizadas; los Ab que reconocen dichos epitopes no presentan características particulares.