La glucógeno sintetasa kinasa 3 (GSK-3) como un factor de regulación del splicing alternativo

NICOLÁS NIETO MORENO; CARMEN CUENCA; FLORENCIA VILLAFAÑEZ; GASTON SORIA; MANUEL J. MUÑOZ; ALBERTO R. KORNBLIHTT

Workshop; Workshop Biología Celular y Molecular del ARN; 2018

Glycogen synthase kinase 3 (GSK-3) as a novel regulator of alternative splicing La glucógeno sintetasa kinasa 3 (GSK-3) como un factor de regulación del splicing alternativo Nicolás Nieto Moreno1, Carmen Cuenca1, Florencia Villafáñez2, Gastón Soria2, Manuel J Muñoz1, Alberto R Kornblihtt1 1IFIBYNE-UBA-CONICET and Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina, 2CIBICI-UNC-CONICET and Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Nacional de Córdoba, Córdoba, ArgentinaEn nuestro laboratorio estudiamos la respuesta transcripcional y de splicing alternativo (SA) al daño al ADN producido por luz ultravioleta (UV) en células humanas en cultivo. Las lesiones en el ADN producidas por la luz UV provocan una cascada de transducción de señales que finaliza en la hiperfosforilación de la RNA polimerasa II (RNAPII) y una reducción en la tasa de elongación. Esto produce cambios en los patrones de SA en el marco del modelo de acoplamiento cinético entre la transcripción y el SA. Para identificar qué factores vinculan las lesiones en el ADN con la RNAPII desarrollamos un sistema reportero fluorescente de SA que permite conocer la regulación del SA de forma rápida y sencilla: consiste en un minigén inducible que expresa las proteínas GFP o dsRed según se incluya o no un exón alternativo. Con este reportero, realizamos un screening con 686 inhibidores de quinasas del Public Kinase Inhibitor Set (PKIS2 library) de GlaxoSmithKline. De los 686 inhibidores analizados, sólo 14 demostraron tener un efecto en la regulación del SA en respuesta a UV. En particular, la glucógeno sintetasa kinasa 3 (GSK-3) es un blanco común a cerca de la mitad de los inhibidores. Por lo tanto, nos centramos en el estudio del rol de GSK-3 en la regulación del SA, primeramente trabajando con inhibidores altamente específicos, y luego con células en las que eliminamos la expresión de las isoformas a y b de GSK-3, provenientes de dos genes parálogos, mediante la tecnología CRISPR.