Modulación de la actividad del transportador MRP2 por TNF-α: rol de las proteínas PI3k y ERK1/2

CIRIACI N; BAROSSO I; ANDERMATTEN RB; MAIDAGÁN PM; RUIZ ML; SANCHEZ POZZI

Mar del Plata

Congreso; SAIC-SAFIS 2015; 2015

SAIC-SAFIS

TNF-α junto con IL-1ß e IL-6 media la disminución de la actividad del transportador canalicular Mrp2 producida por lipopolisacárido. Se desconocen las vías de señalización por las que TNF -α altera la función del transportador, pero se sabe que esta citoquina activa PI3K y la MAP quinasa ERK1/2. Objetivo: Evaluar si PI3K y ERK1/2 participan en la alteración del transporte de Mrp2 mediada por TNF ?α y si están ubicadas secuencialmente o en vías de señalización distintas. Metodología: Duplas aisladas de hepatocitos de rata (DAHR) se incubaron con TNF-α (6,25pg/ml, 20 min) en presencia del inhibidor de PI3K, Wortmanina (W 100nM); el inhibidor de MEK1/2, PD980589 (PD 5µM, cascada arriba de ERK1/2), y ambos inhibidores en simultáneo. Finalmente, se expusieron a clorometilfluoresceína diacetato (2,5µM) cuyo metabolito, glutatión metilfluoresceína (GMF), es sustrato de Mrp2. Por microscopía de fluorescencia se determinó el porcentaje de DAHR que acumularon GMF en la vesícula canalicular (cVA). En hepatocitos aislados tratados con TNF-α se analizó la activación por fosforilación de las proteínas ERK1/2 y AKT (cascada abajo de PI3K) mediante Western Blot. Resultados: (% del control±EE, n:3-10) TNF-α redujo cVA-GMF (66±3a), mientras que la inhibición de PI3K y MEK1/2 previno la disminución por TNF-α: TNF-α+W (86±4a,b) y TNF-α+PD (84±2a,b). La coinhibición PI3K y MEK1/2 produjo sumación de efectos: TNF-α+W+PD (97±8b,c). El tratamiento con TNF-α provocó un aumento máximo de los niveles fosforilados de AKT (364±64a) y ERK1/2 (223±50a) a los 20min. Estos efectos fueron prevenidos por el agregado de los inhibidores cascada arriba: W (AKT: 112±2b) y PD (ERK1/2 63±32b). a vs control, b vs TNF-α, c vs TNF-α+W o TNF-α+PD, p