Rol de la rafinosa sintasa (RS) de tomate en la sintomatología del daño por frío

FERREYRA L.; BUSTAMANTE C.; MULLER G.; DRINCOVICH M.F.

Rosario

Jornada; Primeras Jornadas de Ciencia y Tecnología de la FBIOyF; 2021

Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas

El tomate (Solanum lycopersicum) es un fruto perecedero que después de ser cosechado se deteriora a temperatura ambiente, por lo que es necesario el uso de bajas temperaturas durante el transporte y almacenaje para prolongar su vida en estantería. Sin embargo, esto lleva a problemas fisiológicos denominados daños por frío (chilling injury, CI). Estudios de esta problemática han llevado a la identificación de genes que podrían cumplir un rol en la tolerancia a este daño, entre ellos aquellos que codifican para rafinosas sintasas (RSs). En estudios in silico previos del grupo de investigación, se han encontrado dos putativas RSs que se expresan en frutos de tomate (Solyc02g086530 y Solyc03g112500). Además, se compararon in silico con el programa cisAnalyzer (Gismondi y col 2020) las secuencias promotoras de estas RSs (2000 pb corriente arriba del ATG) donde se observaron motivos relacionados al estímulo por frío, como el elemento en cis C-repeat (CRT)/dehydration-responsive element (DRE) y el ARR5/7/BS. Por este motivo, se pretende dilucidar los mecanismos moleculares de este daño profundizando en el estudio de RSs aplicando la técnica de silenciamiento génico inducido por virus (VIGS). Para llevar este objetivo a cabo, se utilizará el sistema de vectores VIGS pTRV1 y pTRV2 (virus del mosaico del tabaco). Primero, se buscarán los fragmentos de las secuencias a silenciar en SGN VIGS Tool (https://vigs.solgenomics.net/), se diseñarán los primers correspondientes para amplificar los fragmentos por PCR y se clonarán los mismos en el vector PCR8/GW/TOPO. Posteriormente, se subclonarán en el vector pRTV2. El método de agroinflitración va a ser el descripto por Quadrana y col (2011), en el cual se infiltran flores una semana anterior a la antesis.En una etapa posterior del proyecto, es decir, una vez obtenidos los tomates con los genes RS silenciados se someterá a los mismos a distintos tratamientos poscosecha para analizar la respuesta al daño por frío, mediante análisis fisiológicos de los síntomas que produce este daño como mediciones de pérdidas de electrolitos. Por otro lado, se realizarán RT-PCR para controlar los niveles de transcriptos de las RSs.