Cooperación Bilateral Argentino – Francés

ABATE; CARLOS MAURICIO; AMOROSO, MARÍA JULIA; POLTI, MARTA ALEJANDRA; SIÑERIZ, MANUEL; ALBARRACÍN, VIRGINIA

2003-01-01

2005-01-01

Biológica

Sanidad ambiental

1-                 Transformación de las cepas Streptomyces R 25 y Bacillus Zan044, por el plásmido pIJ8660, portador del gen de fluorescencia EGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein), por electroporación. 2-                 Selección de colonias por fluorescencia (microscopio de fluorescencia), y por la resistencia al cadmio. Fueron seleccionadas 4 colonias de Bacillus Zan044, y 3 colonias de Streptomyces R 25. 3-                 Se hicieron trasplantes sucesivos (10) de las colonias escogidas en medios no selectivos, para determinar si la fluorescencia estaba presente todavía (presencia del plásmido). 4-                 Determinación de la absorción de cadmio en medio líquido sintético (PTYG 10% para Zan 044, y Medio Mínimo para R 25), y en extracto de suelo, de las colonias transformadas y de la cepa salvaje. Las cantidades de cadmio utilizadas fueron de 0, 1, 5 y 10 ppm (mg/l de CdNO3). No se encontraron diferencias significativas de absorción específica entre los transformantes y las cepas salvajes. 5-                 Selección de las colonias sobre medios sólidos con antibiótico (el plásmido presenta un gen de resistencia a la apramicina). Se utilizaron menores concentraciones de antibiótico. 6-                 Inoculación de suelos estériles y no estériles por las colonias transformadas seleccionadas de Zan044 y la cepa salvaje (testigo). Los frascos con suelo (200 g de suelo ajustados a 20% de humedad) fueron incubados durante una semana a 20°C, al término de la cual se hicieron diluciones sucesivas para plaquear en cajas de Petri con medio sólido, y realizar el recuento (luego de 48 h a 25°C) de colonias. Se inocularon las cepas de R25 transformadas y la salvaje. 7-                  Se intentó realizarla técnica de PCR para amplificar el gen de la fluorescencia (el fragmento EGFP) en las colonias luego de 10 repiques sucesivos, sin encontrar resultados totalmente satisfactorios.