Servicio Tecnológico de Alto Novel (STAN) INFORME TECNICO

JUAN MANUEL FERNANDEZ; EDUARDO ALBERTO PARELLADA; EDUARDO MORAN; CLAUDIO BORSARELLI

2020-06-09/2020-06-09

Química

Alimentos

Determinación espectrofotométrica de HMF en mieles de Coopsol ? Informe Téc. INBIONATEC ? Junio 2020Página 1 de 5Instituto de Bionanotecnología del NOA(INBIONATECConsejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET)Universidad Nacional del Santiago del Estero (UNSE)RN9, Km 1125. Villa El Zanjón. (G4206XCP).Santiago del Estero. Argentina.Web: https://inbionatec.conicet.gov.ar/ ;E-mail: inbionatec@gmail.comSTAN#04/20FECHA9/6/2020Servicio Tecnológico de Alto Novel (STAN)INFORME TECNICOSOLICITANTE: Cooperativa Coopsol Ltda, Rubia Moreno, Santiago del EsteroCONTACTO EMPRESA: Ing. René Sayago (Email: renesayago@coopsol.com.ar)1. ACTIVIDAD ESPECÍFICACuantificación de 5-hidroximetil-2-furfural (HMF) en muestras de miel mediante espectrofotometría UV.2. PERSONAL INBIONATECTécnico Profesional: Lic. Juan Manuel FernándezTécnico Profesional: Dr. Eduardo Alberto ParelladaInvestigadores: Dr. Claudio D. Borsarelli y Dr. Faustino E. Morán Vieyra3. REACTIVOS UTILIZADOS:Provisto por Coopsol: Reactivo 1: Ferricianuro de potasio 15% P/V Reactivo 2: Acetato de cinc 30%P/V Reactivo 3: 25 L de bisulfito de sodio 40% P/P disuelto de 5 mL de agua destilada.Provisto por INBIONATEC: Agua tipo 1 (Equipo Osmoion, conductividad 0.060 μSiemens/cm)4. PROCEDIMIENTO REALIZADO:1- En un vaso de precipitado se pesó 5.00 (±0.01) g de miel utilizando una balanza granataria Shimadzu TXB622L.y se disolvieron con 25 mL de agua tipo I.Determinación espectrofotométrica de HMF en mieles de Coopsol ? Informe Téc. INBIONATEC ? Junio 2020Página 2 de 52- La disolución se transfirió a un matraz volumétrico de 50 mL. 3- Se adicionó 0.5 mL del Reactivo 1 y se mezcló por agitación. Luego se adicionó 0.5 mL del Reactivo 2 y se agitó nuevamente. Se enrazó al aforo con agua tipo I. 4- Se filtró la disolución del matraz con filtros comerciales de 0,45 μm y de 0.22 μm, desechando los primeros 5 mL de filtrado. El filtrado se recoge en un vaso de precipitado limpio. 5- Para cada miel se prepararon muestras por duplicado y a cada una se realizaron tres (3) lecturas de absorbancia, utilizando el equipo Randox RX (Coopsol) con lectura a longitud de onda fija y los espectrofotómetros Agilent 8453 y Ocean Optics USB2000 (INBIONATEC), encendidos al menos con 20 min de anterioridad. 6- Con una pipeta automática con puntas descartables se trasvasó 1 mL de la disolución filtrada de miel en la cubeta de cuarzo QG, provista por COOPSOL. 7- Con otra punta se adicionó 1 mL del Reactivo 3 a la cubeta de cuarzo (con la punta sumergida en la muestra, presionando y soltando el botón de descarga para producir la mezcla de ambas soluciones y finalmente presionando hasta el segundo tope). Esta mezcla se midió en el espectrómetro Randox accionando PLAY, registrándose los valores de absorbancia (A) a 280 nm y a 340 nm. Esta medición, se registra como ?Blanco? o ?Referencia? por el software del equipo. 8- La misma la cubeta de cuarzo con la solución se colocó en los espectrofotómetros Ocean Optics USB2000 y Agilent 8453, registrándose el espectro UV-Vis entre 200-850 nm y extrayendo los valores de absorbancia (A) a 285 nm y a 340 nm. 9- Se descartó la solución de miel de la cubeta, se enjuagó la cubeta repetidamente con agua tipo I, se colocó 1 mL de la disolución filtrada de miel y se diluyó con 1 mL de agua tipo I. Se mezcló en la cubeta y se registró la Absorbancia a 280 nm y 340 nm con el espectrómetro Randox. El equipo registró esta medición como ?Sample?. 10- La misma solución ?Sample? se colocó en el espectrofotómetro modular de fibra óptica UV-vis Ocean Optics y Agilent 8453, registrándose el espectro UV-Vis entre 200-850 nm y extrayendo los valores de absorbancia (A) a 285 nm y a 340 nm.Determinación espectrofotométrica de HMF en mieles de Coopsol ? Informe Téc. INBIONATEC ? Junio 2020Página 3 de 5La concentración de HMF se cuantificó mediante el método espectrofotométricode White,1,2 utilizando las siguientes ecuaciones   A A A A  KKgmgHMF        max 340 sample max 340 blanco ( ) ( )10 (Kg)(mL) 10 (L.mL )(L.mol cm ) (cm)PM 10 (mg.mol )33 -1cubeta mat raz.1 1max3 1HMF  miel mV VbKdonde K = 149,7 utilizando max = 16830 M-1cm-1 propuesto originalmente porWhite y otros autores.3Sin embargo, Truzzi et al4 recomiendan utilizar max = 15369 M-1cm-1 paramuestras con [HMF] > 5 mg/Kg, debido a efectos de matriz, y por lo tanto K = 164.Para muestras en el rango de 1 < [HMF] (mg/Kg) < 5, se recomienda utilizarel factor K = 149.7. De esta forma, el método espectrofotométrico coincide con ladeterminación por HPLC con una SD 1-2%.4