CLONACIÓN, EXPRESIÓN Y PURIFICACIÓN DE PROTEÍNAS FOTORRECEPTORAS UTILIZANDO TECNOLOGIAS DEL ADN RECOMBINANTE

ABATEDAGA, INÉS; VALLE, LORENA ; BRAVO, EUGENIA GUILLERMINA

Santiago del Estero

Jornada; X Jornada de Estudiantes y Jóvenes Investigadores; 2022

Centro de estudiantes FAyA-UNSE. Semillero de Investigación FAyA-UNSE

En el presente trabajo se buscó optimizar las técnicas necesarias para la síntesis mediante tecnología recombinante de proteínas fotorreceptoras. El labor desarrollado consistió en la clonación de dos proteínas fotorreceptoras: 7155 (620 pb) y 5661 (372 pb) utilizando como plásmido de clonado pGEMT-easy, para lo cual fue necesario llevar a cabo la técnica de PCR de los genes que fueron adquiridos comercialmente. Una vez obtenido el plásmido ligado al gen correspondiente, se transformaron células Top 10 para su producción, y posterior purificación y secuenciación. A partir del análisis de las secuencias de los genes con resultados positivos, se llevó a cabo una digestión enzimática dirigida de los genes del plásmido a fin de insertarlo en un plásmido de expresión y poder obtener la proteína heterologa. Para ello se utilizó el plásmido pET28 y Top 10 en principio para clonar el plásmido, purificarlo y secuenciarlo. Se analizaron las secuencias teniendo en cuenta la conservación del gen, el ORF y todos los componentes necesarios para la producción y purificación de las proteínas. Al obtener resultados positivos, se procedió a la inducción de la expresión proteica utilizando células Bl21, alcanzando resultados positivos para ambas proteínas. Por último, se diseñaron mutantes sitio-especificas dirigidas a interrumpir el motivo responsable de la capacidad fotorreceptora, logrando el clonado de las mutantes en plásmido pGEMT.