Vector baculoviral para la administración delfactor inducible a hipoxia resistente a normoxia en conejos con enfermedad arterial periférica experimental.

CRISTIAN N NUÑEZ; CUNIBERTI, LUIS; CASTILLO, MARTHA GIOVANNA; CROTTOGINI, ALBERTO; OLEA, FERNANDA DANIELA; GIMÉNEZ, CARLOS SEBASTIÁN; MARIANO N BELAICH; MENDIZ OSCAR

CABA

Congreso; 45° CONGRESO ARGENTINO DE CARDIOLOGÍA SAC 2019; 2019

Sociedad Argentina de Cardiología SAC

Introducción: La enfermedad arterial periférica (EAP) es una dolencia circulatoria de curso lento y progresivo causada por el estrechamiento de la luz de los vasos arteriales que irrigan los miembros inferiores. Si no se controla o revasculariza a tiempo el cuadro evoluciona con complicaciones como gangrenas, sepsis e incluso la amputación del miembro. Frente a esta problemática, las terapias basadas en la manipulación genética que estimulen la angio-arteriogénesis en el músculo dañado, emergen como una posible alternativa. Los baculovirus (Bv) son virus de insectos no infectivos en humanos, utilizados como vectores en terapia génica por su gran eficiencia y buen perfil de bioseguridad. Por otro lado se sabe que el factor inducible por hipoxia (HIF-1) es un factor de transcripción heterodimérico (α/β), capaz de estimular la expresión de más de 60 genes de adaptación a la hipoxia incluido el factor de crecimiento endotelio vascular (VEGF). Sin embargo, en normoxia la subunidad α (HIF-1α) es degradada impidiendo la regulación y expresión de los genes de adaptación. Nuestra hipótesis es que la inyección intramuscular de un Bv codificante para una forma mutada de HIF-1α no degradable en presencia de oxígeno (Bv-mHIF-1α), favorecería el aumento de la angio-arteriogénesis en un modelo de conejos con EAP.Objetivo: Estudiar en un modelo cunino de EAP el efecto de la inyección intramuscular de Bv-mHIF-1α en comparación a un vector sin el inserto (Bv-null) sobre el número de vasos colaterales cuantificados por angiografía. Materiales y métodos: En mioblastos esqueléticos de aductor (Msk) se evaluó por citometría de flujo la eficiencia de transducción (ET) de los Bv a diferentes multiplicidades de infección (MOI) y por RT-qPCR la sobreexpresión de HIF-1α. A continuación, en 10 conejos se extirpó en forma estéril y bajo anestesia general la arteria femoral superficial del miembro posterior izquierdo desde su origen hasta su bifurcación en las arterias safena y poplítea. Siete días después, los animales se distribuyeron al azar en los siguientes grupos experimentales: 1) Grupo Bv-null (n=5): se inyectó 1 ml de PBS con 109 copias del vector baculoviral sin el gen terapéutico; y 2) Grupo Bv-mHIF-1α (n=5): se inyectó 1 ml de PBS con 109 copias del vector baculoviral con el gen terapéutico mHIF-1α. Esas dosis totales se distribuyeron en 10 alícuotas iguales (100 µl/iny.) en cuádriceps (4 iny.) y aductor (6 iny.). Catorce días post-tratamiento se realizó angiografía digital en ambos miembros posteriores con contraste (IOPAMIRON 300, 4 ml).Resultados: La ET seleccionada (43,3%) se obtuvo a un MOI de 100. Los niveles de mRNA de HIF-1α en células tratadas con Bv-mHIF-1α fue mil veces superior a los observados en células control (p