Perfil de expresión gènica de Tbx20 y genes reguladores del ciclo celular en diferentes estadìos proliferativos de cultivo de cardiomiocitos y de corazones de ratas.

SIMONIN, ALEJANDRO; CROTTOGINI, ALBERTO; BAUZA, MDR; CASTILLO, MARTHA GIOVANNA; LOCATELLI, PAOLA; LÓPEZ AE; CUNIBERTI LUIS ALBERTO; OLEA, FERNANDA DANIELA

Buenos Aires

Congreso; 45° CONGRESO ARGENTINO DE CARDIOLOGÍA SAC 2019; 2019

Sociedad Argentina de Cardiología SAC

Introducción: para inducir regeneración miocardica, uno de los posibles enfoques es estimular la autorregeneración miocárdica mediante la manipulación del ciclo celular del miocardiocito adulto con el fin de inhibir el freno mitótico a nivel de los checkpoints G1/S y G2/M del ciclo celular del miocito. Se ha demostrado que la inhibición de la transcripción del gen TBX20 en cultivo de células mioblásticas indujo freno del ciclo celular en G2/M. Por lo tanto la sobreexpresión del factor de transcripción TBX20 podría ser una estrategia terapéutica para inducir la entrada al ciclo celular a través de la estimulación de genes pro mitóticos e inhibición de genes frenadores del ciclo celular.Objetivos: en el presente trabajo quisimos evaluar el efecto de la sobreexpresión de Tbx20 en cultivos de cardiomiocitos de ratas neonatales.Métodos: previamente, en corazones de ratas de diferentes estadios proliferativos, hemos demostrado que tanto la expresión del gen TBX20 como el gen ciclina D1 (pro mitótico del ciclo celular) aumentan en los estadios proliferativos y disminuyen en los estadíos no proliferativos, mientras que el perfil de expresión del gen p21 (frenador del ciclo celular) fue inversa.Cardiomiocitos neonatales de rata (CM) fueron transducidos a los 3 dìas de cultivo con un vector baculoviral sobreexpresando el gen de TBX20 humano (Bac-TBX20). Se midiò por RT-qPCR la expresión de genes pro proliferativos del ciclo celular (ciclina D1 y MEF2C) y del gen frenador del ciclo (p21) a dìa 5 (máximo estadio de proliferación celular) y a dìa 8 (estadio sin proliferación celular) tanto en CM-Bac-TBX20 como en CM sin translucir. Se realizò ensayo de proliferación celular (MTS) a p21Previamente en cultivos de cardiomiocitos neonatales de ratas se midió la proliferación celular a día 2, 5 y 9 post natales por ensayo de MTS. Se realizó RT-qPCR para Tbx20, Ciclina D1, P21 y P27 de cultivo de cardiomiocitos de dìa 2, 5 y 9 post natales y de tejido miocárdico de ratas de 2, 5 y 9 dìas de nacidas y adultas.Resultados: La proliferación celular fue màxima a los 5 dìas del cultivo (3.87±0.14 Area under the curve) vs día 2 (1.56±0.02AUC) y día 9 (1.59±0.1, p