CONDICIONES DE TRABAJO PARA EL ENSAYO DE COMETA

GIGENA,F.; SIMONIELLO, M.F.; KLEINSORGE, E.; LOTESTE, A.; PARMA, J.; CAMPANA, M.

FABICIB

Congreso; III ENCUENTRO BIOQUIMICO DEL LITORALY VI JORNADAS E COMUNICACIONES TECNICO-CIENTiFICAS; 2005

Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas (FBCB) de la UNL, los Colegios de Bioquímicos de Santa Fe y Entre Ríos, y la Federación Bioquímica de la Prov. de Santa Fe

Los estudios ecotoxicol6gicos adquieren significancia cuando pueden aplicarse organismos aut6ctonos a la evaluaci6n de las acciones nocivas de contaminantes sobre el ambiente. Una de las tecnicas aplicadas a estos estudios es la desarrollada por Singh en 1998 conocida como Ensayo de Cometa 0 Electroforesis en Gel de una Sola Celula. EIsabalo (Prochilodus lineatus), una importante especie de los rfos de nuestra regi6n, posee caracterfsticas hematol6gicas particulares. Es capaz de autorregular su densidad celular en sangre de acuerdo a las condiciones del ambiente donde habita. Si dicho ambiente se encuentra en limnofase es capaz de aumentar la concentraci6n de eritrocitos, en cambio, si se encuentra en potamofase disminuye la concentraci6n de los misrnos, asf optimiza su metabolismo acorde a las cantidades de oxigeno y alimento presentes. EIEnsayo Cometa es un rnetodo rapido, sensible y relativamente barato para detectar roturas de cadenas de DNA por genot6xicos. Las muestras de sangre obtenidas por disecci6n del pedunculo caudal de los peces fueron embebidas en un gel de agarosa y colocadas en lisis en una soluci6n con detergentes yalta concentraci6n salina. Luego de la electroforesis, durante un tiernpo determinado bajo ciertas condiciones de amperaje y voltaje, las celulas fueron teiiidas con Bromuro de Etidio y observadas bajo microscopio de fluorescencia donde se visualizaron como un cometa. con su cabeza representada por el ADN inmovilizado y la cola por el ADN que migr6. De acuerdo a la especie utilizada se deben realizar ajustes en las condiciones de trabajo a los fines de asegurar reproducibilidad y sensibilidad en los resultados. Para ello, fue necesario disminuir la temperatura de trabajo a 25 DC, el tiempo de "unwinding" y de electroforesis a cinco minutos y diluir la muestra de sangre para lograr una concentraci6n ideal que permita una buena visuaJizaci6n en el microscopic sin la superposici6n de colas entre cometas adyacentes. De esta forma se logr6 obtener resultados reproducibles que perrnitiran la aplicaci6n del ensayo a estudios de genotoxicidad.