Efecto de fitoestrógenos en la proliferación y migración de células normales y tumorales. Vías de señalización involucradas

VIRGINIA LEZCANO; SUSANA MORELLI

Congreso; XXXII Reunión Científica Anual de la Asociación Argentina de Osteología y Metabolismo Mineral (AAOMM); 2015

Existe una tendencia global al uso de compuestos bioactivos naturales, como los fitoestrógenos, presentes en gran variedad de alimentos que poseen numerosos efectos saludables, entre los que se destacan efectos anticancerígenos, antioxidantes y cardiovasculares. Las isoflavonas como Genisteina (GEN) y los flavonoles como la Quercetina (QUE) son polifenoles con una gran similitud estructural a los estrógenos humanos. En el presente trabajo se estudian los efectos de los fitoestrógenosGEN y QUE en células receptor de estrógeno positivas: preosteblásticas normales de calvaria de ratón (MC3T3) y células tumorales de cáncer mamario humano (MCF-7).La migración celular es un proceso importante en la cicatrización, colocación de implantes, reparación de fracturas,respuesta inmune, entre otros. Errores durante este proceso tienen consecuencias patológicas, incluyendo la formación de tumores y metástasis. Para estudiar el efecto de QUE y GEN en la migración de MCF-7 y MC3T3 se utilizó el ensayo de reparación de la herida. Los resultados muestran que en células preosteoblásticas normales GEN estimula la reparación de la herida en forma dosis-dependiente con un porcentaje de cierre a las 24h de tratamiento de 40,98±4,39%; 59,86±1,85% (p˂0,01) y 78,95±4,82% (p˂0,01) para control, 0,01µM y 1µM, respectivamente. Además, QUE induce el cierre y reparación de la herida, sin diferencias significativas entre las dosis estudiadas, siendo 69,84±3,69% (p˂0,01) para 1µM y 67,13±3,99% (p˂0,01) para 10µM.La proliferación celular se evaluó mediante el ensayo de exclusión del colorante azul de tripan. Luego de 48h de tratamiento, se contaron las células que excluyen el colorante (vivas). GEN y QUE 1µM aumentan el número de preosteoblastos normales en 145,66±5,76% y 150,16±5,58% (p˂0,05), respectivamente, y no modifican la proliferación de células tumorales. Una dosis mayor de QUE (100µM) produce un efecto inhibitorio de la proliferación en ambas líneas celulares, siendo máxima la inhibición en células tumorales.Dado que numerosos trabajos demuestran el poder anti-oxidante de los polifenoles,fue de interés evaluar la acción de GEN y QUE en la apoptosis inducida por H2O2 en preosteoblastos. El pre-tratamiento (48h) con los fitoestrógenos previno la muerte celular por estrés oxidativo, siendo más efectiva la dosis mayor de GEN (1µM) (Ctrl. vs. GEN, 26,8±4,21 vs. 7,6±1,8, p˂0,05).Las vías de señalización involucradas se estudiaron por Western blot midiendo los niveles de fosforilación de las proteínas Erk1/2, Akt y Bad; luego del tratamiento con QUE a 5, 15, 30 y 60 min. QUE aumenta pErk1/2 en forma dosis-dependiente, siendo máximo a 15 min. Además, QUE 100µM disminuye pAkt en todos los tiempos probados y esto conduce a la disminución de la fosforilación de la proteína proapoptótica Bad. La inhibición de la vía de supervivencia de Akt y Bad, estaría involucrada en la muerte celular por QUE.En conjunto, los resultados indicarían que dietas ricas en polifenoles serían útiles como terapia alternativa en enfermedades óseas y tumorales, por sus efectos opuestos pero beneficiosos para ambos eventos.