El efecto antiapoptótico del 17ß-estradiol en células de músculo esquelético involucra a PKCδ, JNK y p66Shc

LA COLLA, ANABELA; PRONSATO, LUCÍA; MILANESI, LORENA; BOLAND, RICARDO; VASCONSUELO, ANDREA

Buenos Aires

Congreso; XXXI Reunión Anual de la Asociación Argentina de Osteología y Metabolismo Mineral (AAOMM); 2014

La hormona 17β-Estradiol (E2) actúa sobre diversos tejidos no asociados a la reproducción, entre los que se incluye al músculo esquelético. Hemos demostrado que el E2 en concentraciones fisiológicas previene la apoptosis inducida por peróxido de hidrógeno (H2O2) en mioblastos de músculo esquelético. El objetivo del presente trabajo es profundizar el conocimiento de los mecanismos moleculares involucrados en la acción antiapoptótica del E2 en células musculares. Observamos que el agente apoptótico activa a PKCδ y a JNK en células C2C12. Por ensayos de TUNEL usando inhibidores específicos mostramos que la activación de dichas quinasas medía la apoptosis inducida por H2O2 en células de músculo esquelético. Además, ensayos de Western blot revelaron que PKCδ actúa corriente arriba de JNK. Y demostramos que E2 inhibe la activación de ambas quinasas, lo que conduce a la inhibición de la fosforilación y de la translocación a mitocondria de la proteína adaptadora p66Shc, la cual está asociada a estrés oxidativo. De importancia, el pretratamiento con E2 disminuyó los niveles de ARN mensajero de p66Shc, inducidos por el agente apoptótico. Mediante la utilización del colorante catiónico TMRM demostramos que el pretratamiento con E2 previene la pérdida del potencial de membrana mitocondrial (Δψm) inducida por el H2O2, al inhibir la translocación mitocondrial de p66Shc. Finalmente, por qRT-PCR cuantitativa demostramos que E2 disminuyó los niveles de ARNm inducidos por el H2O2 de las proteínas apoptóticas PERP y Puma asociadas a la pérdida del Δψm, mientras que aumentó los de la proteína antiapoptótica Bcl-2. En conjunto, nuestros resultados contribuyen al discernimiento de los mecanismos activados por el E2 que se traducen en un efecto protectivo frente la apoptosis en células musculares. El conocimiento de estos mecanismos será de ayuda para encontrar nuevos blancos en el desarrollo de terapias para miopatías asociadas a desregulación de apoptosis por déficits hormonales.