Rol de los roedores como reservorio ambiental de los integrones de clase 2.

NARDELLI M., ; BLANCO CRIVELLI; GIACOBONI G; MARTINI M.C.; DEL PAPA M. F.; LAGARES A.; BENTANCOR A.; CENTRÓN D.

Congreso; AAM; 2013

Los integrones están compuestos de una integrasa, su sitio de reconocimiento y un promotor para la expresión de los genes cassettes. En base a esto, dan lugar a plataformas genéticas presentes en el 17% de los genomas secuenciados hasta el momento, capaces de mediar recombinación sitio-específica de cassettes móviles, dando lugar a dinámicas regiones variables. Se han reportado innumerables cepas clínicas con integrones asociados a la multirresistencia antibiótica, confiriendo resistencia a casi todos los antibióticos de uso médico. Los integrones de clase 1 son los más frecuentes en aislamientos clínicos, seguidos por los de clase 2. Estos últimos han sido descriptos asociados a las actividades humanas, pero poco se sabe respecto de su reservorio ambiental. El objetivo de este trabajo es estudiar dicho reservorio utilizando muestras de agua, suelo, heces de animales silvestres e hisopados rectales de ganado vacuno y de roedores (géneros Rattus, Oligoryzomys y Mus), aislados en diferentes provincias de nuestro país. Con el fin de detectar integrones de clase 2, se procedió a la búsqueda por PCR de la integrasa de clase 2 (intI2) utilizando cebadores específicos que generan un amplicón de 467 pb. Para el procesamiento de las muestras de agua, suelo y heces de animales silvestres se siguió la metodología de siembra en placas de medios ricos sin selección antibiótica y aislamiento de colonias morfológicamente distintas. La presencia de intI2 en los aislamientos resultantes fue analizada por PCR de colonia. Con respecto a los hisopados rectales, se realizó un cultivo líquido de la muestra con la posterior extracción de ADN total y PCR. En caso de resultar positiva la PCR, se sembró en placa una dilución del cultivo con el fin de obtener colonias aisladas y poder identificar el o los aislamientos portadores de intI2 por PCR de colonia. En 72 aislamientos de agua y suelo en sitios con distinto grado de urbanización no se detectó intI2, al igual que en 25 aislamientos de heces de animales silvestres. Por otro lado, se dispuso de 28 muestras de ganado vacuno, las cuales solo una resultó ser positiva para intI2. Se identificaron 2 aislamientos con este gen a partir del cultivo inicial, cuya caracterización genotípica por secuenciación del ADNr 16S reveló que se trata de Raoultella ornithinolytica y Enterobacter ludwigii. Por último, de 23 hisopados rectales de roedores, 6 resultaron positivos para intI2. En 5 de ellos pudieron identificarse aislamientos que presentan la integrasa, todos pertenecientes a Proteus spp.. Todos los amplicones del gen intI2 fueron secuenciados y mostraron 100% de identidad con el alelo más común presente en el GenBank y contienen el codón stop prematuro característico de esta integrasa. Trabajos previos sugieren a la actividad agropecuaria como reservorio ambiental de estas estructuras, hecho que no se evidencia en este trabajo. En cambio, podemos describir un nuevo reservorio tomando a los roedores pequeños que habitan en sitios urbanos y suburbanos como hospedadores y a Proteus spp. como bacteria prevalente portadora de integrones de clase 2.