Comparación de dos métodos simples de congelamiento para espermatozoides porcinos

RODRIGUEZ PC; PEREZ COLMAN M; BREININGER E; PETRINELLI A

Resistencia

Congreso; XIX Jornadas de Actualización Porcina. VIII Congreso de Producción Porcina del Mercosur; 2016

INTRODUCCIÓNLas biotecnologías de la reproducción en la especie porcina tienen poco desarrollo debido principalmente a la limitación que existe en el uso del semen congelado en inseminación artificial. Sin embargo, el semen porcino congelado tiene ventajas sobre el semen fresco o el refrigerado, como la posibilidad del transporte a largas distancias, la conservación durante períodos de tiempo prolongados o la preservación de semen de genética de alta calidad. Si bien se han obtenido buenos resultados post-descongelamiento, se necesita de la aplicación de tecnología de alto costo. El objetivo de este trabajo fue comparar dos métodos simples de congelamiento para semen porcino, evaluando como marcadores de calidad los parámetros de: vitalidad, movilidad y el estado de criocapacitación al momento del descongelado.MATERIALES Y MÉTODOSSe obtuvieron, por la técnica de mano enguantada, dos eyaculados distanciados en el tiempo de tres verracos, mantenidos bajo condiciones uniformes y controladas de manejo, sanidad y alimentación. Aquellos eyaculados con movilidad y vitalidad mayor al 70 % fueron congelados y envasados en pajuelas de 0,5 mL, a una concentración final de 5x108 espermatozoides/mL [1, 2]. Luego de la curva de descenso de temperatura hasta llegar a los -5°C, las pajuelas se dividieron en dos grupos para realizar el congelamiento diferencial. Las pajuelas del grupo control estuvieron en contacto con vapores de nitrógeno por 5 minutos (método tradicional), mientras que las pajuelas del grupo tratamiento se colocaron entre dos barras de hielo seco por 10 minutos (método propuesto) [3, 4]. Luego, las pajuelas de ambos grupos fueron almacenadas en nitrógeno líquido (-196 °C) hasta el momento de su evaluación. Se realizaron tres evaluaciones de cada uno de los dos eyaculados congelados de cada uno de los tres animales. En cada evaluación en los espermatozoides descongelados se determinaron los parámetros de movilidad (por microscopía óptica en platina termostatizada a 37°C), vitalidad (por la técnica de eosina/nigrosina) y criocapacitación por la técnica fluorescente de clorotetraciclina (CTC). Los resultados se expresaron como promedio ± error estándar de la media (SEM) y fueron evaluados estadísticamente por la prueba de la t de student. Se consideró un valor de p < 0,05 como estadísticamente significativo.RESULTADOSLa criopreservación de los espermatozoides porcinos disminuye la vitalidad y la integridad de los espermatozoides congelados/descongelados. Como se observa en la figura, la vitalidad de los espermatozoides post-descongelado fue significativamente mayor en el grupo tratamiento (33±3) que en el grupo control (16±2): La movilidad de los espermatozoides porcinos luego de la criopreservación suele ser muy baja y representa uno de los mayores inconvenientes en la utilización de esta biotecnología. Con el método propuesto, la movilidad espermática también mostró una aumento estadísticamente significativo (12±2) respecto a las del grupo control (3±1). El proceso de congelado/descongelado de los espermatozoides induce la criocapacitación, que representa una capacitación prematura e indeseable. El porcentaje de espermatozoides criocapacitados al momento del descongelado fue significativamente menor en el grupo tratamiento (9±1) que en el grupo control (14±1).CONCLUSIONESNuestros resultados demuestran que el método de congelamiento propuesto aumenta el porcentaje de espermatozoides móviles, mejora significativamente la vitalidad del semen porcino criopreservado y disminuye significativamente la criocapacitación, constituyéndose en un aporte relevante al diseño de protocolos de congelamiento para la especie porcina.BIBLIOGRAFÍA1.Breininger y col. Alpha-tocopherol improves biochemical and dynamic parameters in cryopreserved boar semen. Theriogenology 2005; 63:2126-2135.2.Yanagimachi. Mammalian fertilization. En: The physiology of Reproduction, Knobil E, Neill J (Eds.), Raven Press, 1994, pp. 109-317.3.Peña FJ y col. Antioxidant supplementation in vitro improves boar sperm motility and mitochondrial membrane potential after cryopreservation of different fractions of the ejaculate. Anim Reprod Sci 2003; 78: 85-98.4.Wu y col. The combinatorial effect of different Equex STM paste concentrations, cryoprotectants and the straw-freezing methods on the post-thaw boar semen quality. Reprod Domest Anim 2013; 48(1): 53-58. UBACyT 2014-2017 20020130200119BA