Actividad enzimática in vitro de Aspergillus flavus en presencia de glifosato.

BENITO N.; MAGNOLI K.; CARRANZA C.S.; ALUFFI M.E.; BARBERIS C.L.; MAGNOLI C.E,

Buenos Aires

Congreso; XV Congreso Argentino de Microbiología.; 2019

Introducción y Objetivos: Las enzimas son moléculas de naturaleza proteica que catalizan reacciones químicas. Las especies de Aspergillus producen una gran variedad de enzimas hidrolíticas, tales como: pectinasas, amilasas, proteasas, glucosidasas, fosfatasas y lipasas. Se ha observado que la determinación de la producción enzimática por los hongos es un buen indicador de la contaminación fúngica temprana previa al crecimiento de los mismos. No existe suficiente información sobre el efecto del glifosato (GP) sobre la producción de estas enzimas en las etapas iniciales del desarrollo fúngico, por lo que en el presente trabajo, se propuso evaluar el efecto in vitro del herbicida sobre la producción de enzimas glucosidasas relacionadas a la patogenia del hongo bajo diferentes condiciones de aW.Materiales y Métodos: Se seleccionó una cepa de Aspergillus flavus, causante de podredumbre de la mazorca de maíz (AFM 16). Se preparó un medio Agar harina de maíz (AHM) al 3%. Las actividades acuosas de los medios se ajustaron a 0,98, 0,96 y 0,94 con el agregado de glicerol. Posterior al proceso de esterilización se adicionaron los volúmenes correspondientes de glifosato (Roundup Control Max) para obtener concentraciones de 0, 30 y 300 mM. Se removieron 3 discos de agar (6 mm de diámetro) de cada tratamiento a las 0, 24, 48, 72 y 96 hs de incubación. Se les adicionó buffer fosfato de extracción. Las muestras se agitaron a 4ºC, se recuperó 1 ml de sobrenadante y se centrifugó a 4ºC. Se detectó la actividad total de dos enzimas hidrolíticas, β-D-glucosidasa y α-D-galactosidasa, utilizando los sustratos y los buffers correspondientes para cada una de ellas. Se determinó la actividad enzimática como el incremento de la densidad óptica producida por la liberación del sustrato al sufrir la hidrólisis enzimática. La actividad enzimática se expresó como micromoles de sustrato liberado por minuto.Resultados: En general, en los controles, a todas las aW ensayadas, la actividad enzimática de la cepa fue mayor para α-D-Galactosidasa que para β-D-glucosidasa. A 0,96 y 0,94 aW la actividad enzimática se redujo a medida que la concentración de GP aumentó. Cabe destacar que, a 0,98 de aW y a 48 horas de incubación, un aumento significativo en la actividad de β-D-glucosidasa (30 %) fue observado cuando la cepa desarrolló con 30 mM de GP. Durante la evaluación de la actividad de α-D-Galactosidasa, los máximos niveles de actividad fueron observados a 0,96 aW, mientras que, independientemente a la aW testeada, la actividad enzimática máxima se produjo tanto a 24 como a 48 y 72 horas, para 0,96; 0,98 y 0,94 respectivamente. En concordancia con lo observado para la actividad de β-D-glucosidasa, a medida que se incrementó la concentración de GP al medio de cultivo, la actividad de α-D-Galactosidasa se redujo significantemente.Conclusiones: El efecto de este herbicida en la producción enzimática podría suponer la modificación del crecimiento fúngico sobre el sustrato y la consecuente producción de micotoxinas.