Desarrollo de un aditivo antigénico para la vacuna comercial actual contra la diarrea viral bovina basado en la glicoproteína E2 del virus sintetizada establemente por una línea celular de mamíferos

WIGDOROVITZ A; DUS SANTOS MARIA JOSE; PECORA A

2006-10-31

2008-12-30

Biológica

Sanidad animal

* 2.1 MODULO A: Evaluación de la inmunogenicidad de la proteína E2T en bovinos 2.1.1 Objetivo: A partir de los resultados obtenidos en cobayos determinar la capacidad de la glicoproteína E2 deletada secretada por células CHO-K1 (E2-t) de inducir anticuerpos neutralizantes en bovinos 2.1.2 Actividades 2.1.2.1 Formulación de las vacunas Las vacunas experimentales serán formuladas de igual manera que para el ensayo en cobayos (adyuvante oleoso BB lote 352/07 -40% antígeno, 60% adyuvante.) 2.1.2.2 Animales Se utilizarán  bovinos seronegativos, no infectados pertenecientes al INTA previamente testeados para demostrar su estatus sanitario por  ELISA, SN  y PCR 2.1.2.3  Esquema de inmunización Los bovinos serán inmunizados con dos dosis de la vacuna a ensayar, una al tiempo inicial y la otra a los 30 días post-primovacunación. La inmunización se realizará por la vía intramuscular. El volumen de inóculo  será de 5 ml. Se tomarán muestras de sangre a los 15 30 45 y 60 días post vacunación para el posterior análisis de anticuerpos en suero. 2.1.2.4  Seroneutralización viral (SN) El nivel de anticuerpos neutralizantes (AN) se determinará siguiendo el protocolo de Howard y col (1987). Primer experiencia Se inmunizarán 3 bovinos por grupo experimental i.m con 5 ml de cada vacuna. Se plantean los siguientes grupos experimentales: Grupo 1: Vacuna experimental formulada con 5 ugr de E2t concentrada producida en células. Grupo 2: Vacuna experimental formulada con 1 ugr de E2t concentrada producida en células. Grupo 3: Vacuna experimental formulada con 0,2 ugr de E2t concentrada producida en células. Grupo 4: Vacuna experimental formulada con  1ugr de Lac Z (control negativo) Resultado a obtener de INTA: Entregar un informe de la evaluación realizada. Plazo: # 4 meses Segunda experiencia Se inmunizarán 8 bovinos por grupo experimental i.m con 5 ml  para las vacunas correspondientes a los grupos 1, 2 y 3. Para el grupo 4 se inmunizarán 4  animales. No se considera necesario repetir el grupo “Vacuna experimental formulada con la dosis  de E2t considerada como óptima en la experiencia 1” ya que se utilizará la misma producción de antígeno para ambas experiencias Grupos experimentales: Grupo 1: Vacuna comercial Grupo 2: Vacuna comercial  suplementada con sobrenadante de CHOK1 Lacz a la dilución establecida (control negativo) Grupo 3: Vacuna comercial suplementada con dilución  de E2T concentrada establecida    en la experiencia 1 Grupo 4: Vacuna experimental INTA (título VDVB 107 TCID50/ml) (control positivo). Resultado a obtener de INTA: Entregar un informe de la evaluación realizada. Plazo: # 6 meses 2.2 PARTE B: Evaluación de la masa antigénica de la proteína E2 en las vacunas 2.2.1 Objetivos: Estandarizar la técnica de ELISA de manera que  permita la cuantificación de E2 presente en una vacuna formulada con VDVB y/o la proteína E2t  recombinante 2.2.2 Actividades: 2.1.2.1 Evaluación del  ensayo de ELISA desarrollado en el primer año  para la cuantificación de E2 en vacunas Se estudiarán distintos tratamientos sobre las vacunas de manera de poder detectar el antigeno una vez que ha sido formulado. Una vez desarrollado el ensayo se procederá a evaluar el límite de detección, sensibilidad y  especificidad diagnóstica, repetibilidad y reproducibilidad del mismo. Se estudiará si es posible establecer una relación entre los resultados del ELISA y la respuesta inmune obtenida. Resultado a obtener de INTA: Informe de metodología y resultados. Plazo: 4 meses.