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La generación de vacunas convencionales para el Virus de la Diarrea Viral Bovina (VDVB) presenta la dificultad de lograr una masa viral suficiente como para conferir protección. Es por esto que actualmente se está investigando el uso de vacunas a subunidad como una estrategia para sortear esta dificultad. La glicoproteína E2 del VDVB contiene los principales sitios antigénicos responsables de la producción de anticuerpos neutralizantes (AN), los que juegan un papel preponderante en el fenómeno de protección frente a la infección. Esta glicoproteína, entonces, constituye una excelente herramienta para ser utilizada en vacunas a subunidad. En este trabajo se expresó esta proteína fusionada al anticuerpo de simple cadena direccionado a células presentadoras ?APCH? en el sistema de baculovirus recombinante como estrategia para la generacion de una nueva vacuna contra este virus. MATERIALES Y MÉTODOS Para el clonado de la molécula APCH-E2 se utilizó el vector pFastBac Dual, al que se le incorporó el péptido señal de la Melitina y un tag de histidinas en el extremo C-terminal. Se evaluaron dos líneas celulares para la expresión de la proteína: SF9 y H5. Para la detección de la proteína recombinante se utilizó la técnica de Western Blot y para cuantificarla se utilizó un ELISA tipo sándwich indirecto. Con el fin de evaluar la inmunogenicidad de la molécula APCH E2 se realizó un ensayo de dosis-respuesta en el modelo cobayo. El plan de inmunización consistió en dos dosis a los días 0 y 21 con 0,2, 0,5, y 1 ug/dosis, con sangrías en los días 30 y 60 post inoculación (dpi); los sueros se analizaron por seroneutralización (SN). Luego, se evaluó la inmunogenicidad de la proteína en el huésped natural del virus. Para ello se utilizaron 18 bovinos libres del VDVB y se formaron 3 grupos: grupo C+: vacunado con VDVB inactivado, grupo C-: vacunado con una proteína no relacionada y grupo APCH E2: vacunado con 1,5 ug de APCH E2. Los animales fueron inmunizados a los días 0 y 30 y se sangraron a los 15, 30, 45 y 60 dpi; los sueros se analizaron por SN. Se propuso el registro de la vacuna ante el SENASA, para lo cual se debieron generar los bancos de células y de virus trazables y libres de contaminantes. RESULTADOS La proteína APCH E2 fue recuperada de los sobrenadantes de las células de insecto SF9 y H5 en una concentración de hasta 5 ug/ml. La identidad de la proteína fue confirmada por Western Blot. En el experimento de dosis-respuesta en cobayos, con todas las dosis evaluadas los animales desarrollaron AN contra el VDVB mayores a 2,5 a los 30 dpi. Asimismo, en la experiencia llevada a cabo en bovinos, los animales inmunizados con APCH E2 seroconvirtieron luego de la segunda dosis, alcanzando titulos de AN de 3. CONCLUSIÓN Los resultados obtenidos hasta el momento demuestran la factibilidad de utilizar la proteína APCH-E2 para la generación de una vacuna efectiva contra BVDV. A futuro, se incluirán en la formulación las proteínas E2 de los otros genotipos virales circulantes en el país.

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