 Utilización de BLS para inducir anticuerpos de yemas de huevo contra Rotavirus Bovino

BELLIDO D; CHACANA PABLO; MARINA VALERIA MOZGOVOJ; DIEGO DANIEL GONZALEZ; FERNANDO GOLDBAUM; ANDRES WIGDOROVITZ; DUS SANTOS MARIA JOSE

Congreso; X Congreso Argentino de virología; 2011

AAM

Rotavirus bovino (RVB) infecta al ganado en las primeras semanas de vida, debido a esto, la vacunación de los terneros previo al contacto con el virus es dificultosa y poco eficiente. Una alternativa para el control de este agente etiológico es la administración oral de anticuerpos específicos, ya que se ha demostrado que la presencia de éstos en la luz intestinal es capaz de proteger frente a la infección por RVB. Para tal fin, se han utilizado con éxito tanto anticuerpos calostrales, como inmunoglobulinas de yema de huevo (IgY). Las IgY se obtienen a partir de la yema de huevos de gallinas inmunizadas, son análogas a las IgG de los mamíferos y presentan afinidad y sensibilidad similares a éstas. A su vez, la utilización de las IgY presenta varias ventajas en comparación con los anticuerpos calostrales: su obtención, purificación y escalado es más económico y simple. Un punto clave en la producción de IgY es la inmunización de las gallinas. Se han descripto diversos protocolos de inmunización donde se utilizan hasta 6 inoculaciones, con cantidades variables de antígeno, que alcanzan los 200 g de antígeno por dosis. Por ello, el desarrollo de estrategias que permitan optimizar la producción de anticuerpos específicos disminuyendo tanto el número de dosis como la cantidad de antígeno resulta crítico. La enzima de Brucella lumazina sintetasa (BLS) presenta una estructura cuaternaria decamérica de gran resistencia, la cual permite insertar dominios proteicos en sus 10 extremos amino terminales, dando como resultado proteínas quiméricas con un alto nivel de repetitividad y organización. Hemos logrado fusionar la proteína VP8 de RVB (cepa C486, P[1]G6), a la estructura de BLS generando la proteína de fusión BLSVP8d. La misma resultó altamente inmunogénica y fue capaz de inducir protección frente al desafío con RVB en un modelo murino, utilizando una dosis 10 veces menor que la de la proteína VP8d en estado monomérico. Basados en estos resultados y en las ventajas del sistema IgY, en este trabajo evaluamos la capacidad de la proteína BLSVP8d de potenciar la producción de IgY específicos en la yema de huevo. Para tal fin se inmunizaron gallinas con las diferentes proteínas recombinantes: BLSVP8d, VP8d y BLS + VP8d sin estar fusionadas. El nivel de IgY específicos fue evaluado por ELISA y neutralización viral. En ambos casos, el grupo inoculado con BLSVP8d presentó un mayor título que los grupos VP8d o BLS + VP8d. Posteriormente, se decidió evaluar la actividad de las IgY anti-BLSVP8d en un modelo murino de infección por RVB. En el mismo, las IgY anti-BLSVP8d fueron capaces de proteger al 100% de los ratones lactantes con las dos dosis mayores evaluadas (0.5 y 0.1 mg IgY/día) y al 80% de los mismos con la dosis menor (0.05 mg IgY/día). Estos datos demuestran la capacidad de la proteína BLS de actuar como inmunomodulador en gallinas, dando como resultado un aumento de la concentración de IgY específicos en la yema de huevo. Asimismo, demuestran el potencial uso de las IgY como herramientas terapéuticas para patógenos de interés veterinario.