DESARROLLO DE UN METODO DIAGNOSTICO PARA EL VIRUS DE LA LEUCOSIS BOVINA ENZOOTICA EN SEMEN CONGELADO

DUS SANTOS MJ; LAGER I; WIGDOROVITZ A

MONTEVIDEO, URUGYAY

Simposio; 12º SIMPOSIO INTERNACIONAL DE LA ASOCIACION MUNDIAL DE LABORATORIOS DE DIAGNOSTICO VETERINARIO; 2005

ASOCIACION MUNDIAL DE LABORATORIOS DE DIAGNOSTICO VETERINARIO

La Inseminación Artificial (IA) y el uso de la criopreservación del semen han posibilitado un mayor y más fluido intercambio de material genético a nivel nacional e internacional. Paralelamente, ha surgido el interés por conocer las posibilidades que este material genético tiene de vehiculizar y transmitir agentes virales. Es por ello que resulta de vital importancia que los Centros de Inseminación Artificial (CIA) cuenten con un adecuado control sanitario de sus toros y del semen producido para garantizar la ausencia de agentes infecciosos del material genético que comercializan a nivel nacional e internacional. El objetivo de este trabajo fue estandarizar la técnica de PCR para evaluar la presencia de material genético del virus de la Leucemia bovina (BLV) en semen congelado. Se establecieron las condiciones óptimas para detectar por esta técnica un fragmento interno del gen gag. Se determinó el límite de detección de partículas virales utilizando diluciones de un plásmido que contiene el genoma viral completo. Asimismo, se estableció la mínima cantidad de células infectadas detectables por esta técnica. La metodología desarrollada permitió detectar en semen hasta 6 copias de provirus y una célula infectada. Se analizaron muestras de semen congelado en pajuelas francesas de 0.5cc provenientes de dadores seronegativos y seropositivos, pudiéndose determinar la presencia del genoma del virus de la LBE en 6 muestras, de un total de 85, correspondientes a toros serológicamente positivos. Los resultados obtenidos utilizando técnicas de biología molecular fueron confirmados mediante una prueba biológica en ovinos; para ello, se inocularon por la vía endovenosa ovejas adultas con semen o sangre de animales seropositivos y semen de toros seronegativos conteniendo células infectadas con el virus de la LBE. Los resultados obtenidos indican que, si en la muestra de semen a utilizar para IA no se detecta el ADN proviral por PCR, no existiría riesgo alguno de transmisión del virus, aún cuando el toro dador sea seropositivo. El desarrollo de esta metodología permite contar con una sólida herramienta diagnóstica para detectar el virus de la LBE en semen con elevada especificidad y sensibilidad.