EXPRESION Y CARACTERIZACION DE LA PROTEINA QUIMERICA BLS-VP8

BELLIDO D; CRAIG P; MOZGOVOJ M; GONZALEZ D; CHIAVENNA S; OSTACHUK A; WIGDOROVITZ A; GOLDBAUM F; DUS SANTOS MJ

VAQUERIAS CORDOBA

Congreso; XXVI JORNADAS CIENTIFICAS ANUALES DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE VIROLOGIA; 2006

SAV

Las proteínas que forman estructuras poliméricas inducen una alta respuesta inmune en hospedadores inmunocompetentes. Algunas de estas partículas también poseen la capacidad de actuar como carriers de polipéptidos pequeños, que unidos a la estructura de estas proteínas se convierten en inmunógenos poderosos. La enzima lumazina sintetasa de Brucella spp. (BLS) presenta una estructura cuaternaria decamérica, de gran resistencia que permite insertar péptidos en sus 10 extremos amino terminales, dando como resultado proteínas quiméricas con un alto nivel de repetitividad y organización, que inducen eficientes respuestas inmunes. El desafío consiste en lograr proteínas de fusión estables cuando se insertan dominios proteicos de un mayor tamaño. Creemos que la proteína VP8, del rotavirus bovino (RVB) es una buena candidata para ser fusionada con BLS, por sus propiedades fisico-químicas e inmunológicas. La misma posee un dominio, VP8d,  bien estructurado y altamente soluble, que a su vez preserva la capacidad de unión a ácido siálico y los sitios antigénicos relevantes, los cuales inducen anticuerpos neutralizantes. En el presente proyecto se propuso evaluar la capacidad de la quimera BLS-VP8d para inducir una eficiente respuesta inmune apoyado en excelentes resultados obtenidos con la utilización de BLS como presentador de antígenos. Ambas proteínas recombinantes, BLS-VP8d y VP8d se produjeron y fueron purificadas por columnas cromatográficas de intercambio iónico y exclusión molecular, y han sido caracterizadas físico-químicamente mediante técnicas de Dicroísmo Circular, Light Scatering y Fluorescencia, demostrando que ambas proteínas están bien plegadas y son estables. Sus propiedades antigénicas fueron evaluadas por Western Blot, mostrando reactividad frente a un suero policlonal de conejo anti VP4. La capacidad inmunogénica de la quimera fue evaluada en el modelo murino. La respuesta humoral específica contra VP8d y BLS-VP8d se midió por un ELISA diseñado y estandarizado para tal fin. Con este ensayo, se determinó que VP8d aumenta su inmunogenicidad estando fusionada a BLS.