• Desarrollo de un kit de ELISA para detectar y evaluar antigenos del Virus de la Diarrea Viral Bovina en los pasos críticos de la producción de vacunas

PECORA A; OSTACHUK A; LEVY S; ESPINOZA A; DUS SANTOS MARIA JOSE; WIGDOROVITZ A

Vaquerías, Córdoba

Jornada; XXVII Jornadas Científicas Anuales de la Sociedad Argentina de Virología; 2007

sav

DEVELOPMENT OF A ELISA KIT TO DETECT AND EVALUATE BOVINE VIRAL DIARRHEA VIRUS ANTIGEN IN THE CRITICAL STAGES OF VACCINE PRODUCTION Andrea Pecora1, Agustin Ostachuk1, Susana Levy2, Ana Espinoza2, María José Dus Santos1 and Andrés Wigdorovitz1 (1)Instituto de Virología, CICVyA, INTA-Castelar, Buenos Aires, Argentina. (2)Biogénesis-Bagó, Argentina. La Diarrea Viral Bovina (DVB) es una enfermedad infecciosa de distribución mundial que afecta al ganado bovino y se manifiesta por estomatitis erosiva aguda, gastroenteritis y diarrea. La infección en vacas gestantes puede producir muerte embrionaria, aborto, anomalías congénitas, terneros débiles e infección persistente (Baker, 1987). Las pérdidas económicas son significativas. Los animales persistentemente infectados se infectan con una cepa no citopatogénica del virus en los primeros 120 días de gestación, y constituyen una de las principales fuentes de diseminación del virus. La producción de vacunas de BVDV suelen presentar la dificultad de obtener cantidad suficiente de antígeno que pueda inducir altos niveles de anticuerpos neutralizantes. El objetivo de este trabajo fue estandarizar un ELISA para detectar y evaluar antígeno de BVDV en las etapas críticas de producción vacunal. El presente proyecto se desarrollo un kit de ELISA tipo sándwich para detectar al BVDV. El ensayo permite detectar la glicoproteína E2 en producciones de BVDV en cultivos celulares. Con el fin de  cuantificar los niveles de la proteína E2 presente  en las muestras analizadas, se realizó una curva utilizando E2T como antígeno. E2T es una versión truncada de la proteína E2, sin el dominio transmembrana, producida por una línea estable de células CHO-k1. El límite de detección del ELISA desarrollado fue de 0,15 ng E2/ul. El ensayo pudo detectar hasta 103,5 DICT/ml de BVDV, de la cepa Singer. Además, el ELISA estandarizado resultó ser altamente repetitivo y reproducible siendo capaz de detectar y cuantificar la E2 en BVDV infectivo, BVDV inactivado y formulado en la vacuna. Los resultados obtenidos demuestran que el ensayo desarrollado es una herramienta confiable para monitorear la producción de  BVDV en el proceso de formulación de vacunas.