CONICET | Buscador de Institutos y Recursos Humanos

La utilización de vacunas convencionales contra el virus de la diarrea viral bovina (VDVB) presenta ciertas limitaciones por lo que actualmente se está investigando el uso de vacunas a subunidad como una estrategia alternativa. La glicoproteína E2, contiene los principales sitios antigénicos para la producción de anticuerpos neutralizantes (AN), los que juegan un papel preponderante en el fenómeno de protección frente a la infección. La utilización de plantas transgénicas para la expresión de proteínas heterólogas con fines terapéuticos o para su utilización como vacunas ha sido ampliamente reportada. Sin embargo, una limitación importante del sistema ha sido hasta el momento la baja concentración de las proteínas recombinantes encontrada en los tejidos de las plantas. Debido al bajo costo, facilidad de escalado y altos rendimientos de recuperación, este proyecto propone la utilización y puesta a punto de un sistema de partición de dos fases para la concentración de la proteína E2T (fracción soluble de la E2) expresada de forma constitutiva en alfalfa transgénica y la evaluación de dicho antígeno en una vacuna experimental. En trabajos previos hemos descrito la producción de las plantas de alfalfa transgénicas que expresan la proteína E2T así como la caracterización de las mismas. En este trabajo se utilizaron dos metodologías para concentrar la proteína E2T: ultrafiltración por centrifugación (centricon plus 70, Millipore) y partición química en un sistema de dos fases acuosas (PEG 4000 / buffer fosfato pH 7). Ambas metodologías permitieron incrementar hasta 5 veces la concentración de la proteína E2T, sin embargo, es importante destacar que para el sistema de partición la eficiencia del proceso fue aumentando a medida que se incrementaron los volúmenes. Se formularon vacunas experimentales utilizando la proteína E2T expresada en plantas de alfalfa transgénicas concentrada por ultrafiltración o por partición. Asimismo se efectuaron controles empleando extractos de plantas normales con iguales procesos y una vacuna a virus completo inactivado. Para la evaluación de las formulaciones se utilizaron 18 bovinos libres del VDVB. Se formaron 6 grupos de 3 bovinos cada uno y se inmunizaron intramuscularmente con 3 ml de vacuna. A los 30 días se boostearon y se sangraron a los 60 días post inoculación. Se analizaron los sueros por seroneutralización y ELISA. Los animales inmunizados con las formulaciones a base de alfalfa transgénica seroconvirtienron luego de la 2 dosis, alcanzando títulos de Ac similares a los obtenidos con la vacuna a virus inactivado. Las vacunas recombinantes fueron capaces de inducir anticuerpos neutralizantes con títulos superiores a 2, en concordancia con los resultados obtenidos por ELISA. Es importante mencionar que si bien ambos procedimientos de preparación del antígeno vacunal fueron eficaces, para la vacuna formulada a partir de la concentración por filtración fue necesaria una tercera inmunización para alcanzar los mismos niveles de AN. Fue posible, por primera vez, obtener una vacuna recombinante para el VDVB a base de alfalfa transgénica capaz de inducir elevados títulos de anticuerpos neutralizantes. Fue posible obtener una preparación antigénica a subunidad producida a partir de alfalfa transgénica utilizando un único paso de concentración, muy sencillo y económico. Esta observación abre la posibilidad de evaluar su escalado para la formulación de vacunas basadas en la tecnología desarrollada.

enviar mensaje