• Expresión transitoria de proteínas del Virus de la Fiebre Aftosa (VFA) en células de mamífero

MIGNAQUI ANA CLARA; CRISTINA SEKI; MARIA JOSE DUS SANTOS; VANESA RUIZ; ANDRES WIGDOROVITZ

CORDOBA

Jornada; XXVIII Jornadas Científicas Anuales de la Sociedad Argentina de Virología; 2009

SAV

INTRODUCCIÓN: La Fiebre Aftosa (FA) es una enfermedad viral muy contagiosa  que afecta principalmente a animales biungulados. Argentina es un país libre de FA con vacunación, existiendo aún el riesgo de introducción de virus infeccioso debido a la proximidad geográfica con zonas endémicas. La vacuna contra el Virus de la Fiebre Aftosa (VFA) que se utiliza actualmente es a virus inactivado lo que implica contar con  laboratorios de seguridad biológica para su producción. Asimismo, es fundamental lograr la vacuna libre de proteínas no estructurales ya que la presencia de éstas proteínas dificulta la discriminación entre animales vacunados e infectados. Por esta razón, el desarrollo de inmunógenos sintéticos que eviten el manejo del agente infeccioso ha sido desde muy temprano de importancia estratégica en la lucha contra la enfermedad. El objetivo del trabajo, consiste en diseñar y desarrollar un sistema de expresión de proteínas antigénicas del VFA en células de mamífero. MÉTODOS Y RESULTADOS: Las proteínas estructurales del VFA de los serotipos A2001 y O1 Campos se amplificaron por RT-PCR y se clonaron en el vector pGEM TEasy. Los clones se secuenciaron y se sub-clonaron en un vector de expresión en células de mamífero. En el mismo vector de expresión se clonó un gen reportero (EGFP) para ser utilizado como control de transfección. Se optimizaron las condiciones de transfección de células BHK-21 con ambas construcciones, utilizando DNA circular y lineal, y variando las concentraciones de DNA y lipofectamina. A las 24 hs post-transfección se analizó la expresión transitoria de la EGFP en el microscopio de fluorescencia, y de las proteínas recombinantes del VFA serotipo A2001 mediante un ELISA de captura utilizando como control positivo un VFA purificado y titulado. Las proteínas expresadas fueron reconocidas por un anticuerpo (Ac) policlonal anti-VFA así como por cuatro Ac monoclonales que reconocen epítopes conformacionales. conclusiones: Utilizando un sistema de expresión en células de mamífero fue posible expresar proteínas estructurales del VFA (A2001) con un conformación antigénica similar a la encontrada en el virus completo.