• Utilización de plantas transplantómicas de tabaco para la producción de antígenos del virus de la fiebre aftosa y rotavirus bovino, y evaluación de su inmunogenicidad

EZEQUIEL MATIAS LENTZ; MARINA VALERIA MOZGOVOJ; MARIA EUGENIA SEGRETIN; DEMIAN BELLIDO; MARURO MORGENFELD; MARIA JOSE DUS SANTOS; ANDRES WIGDOROVITZ; FERNANDO BRAVO-ALMONACID

CORDOBA

Jornada; XXVIII Jornadas Científicas Anuales de la Sociedad Argentina de Virología; 2009

La utilización de plantas como fuente de producción de antígenos virales y bacterianos ha sido ampliamente explorada con resultados alentadores. Este sistema presenta ciertas beneficios respecto de los sistemas convencionales de producción de proteínas tales como: menores costos de producción, ausencia de patógenos contaminantes para humanos y animales y la posibilidad de escalado a nivel industrial. Sin embargo, en eventos de transformación nuclear, los niveles de expresión de la proteína foránea suelen ser relativamente bajos, constituyendo uno de los factores limitantes para el empleo de esta tecnología. En este sentido, la transformación de cloroplastos representa una alternativa atractiva debido al elevado número de copias del transgén en los mismos y la ausencia de mecanismos de silenciamiento, lo que permite obtener una elevada expresión de la proteína de interés. En el área veterinaria, existen numerosas enfermedades virales cuya importancia radica en las pérdidas económicas que generan a nivel productivo en el país. Entre ellas, las ocasionadas por el virus de la fiebre aftosa (VFA) y el rotavirus bovino (RVB). La fiebre aftosa es una enfermedad altamente contagiosa que afecta numerosas especies animales. La proteína VP1 del VFA contiene un epitope inmunogénico comprendido entre los residuos aminoacídicos 135-160, capaz de conferir protección frente a la infección en un modelo murino. El RVB, es el agente causal de diarreas neonatales en terneros de temprana edad y la proteína de cápside VP8* desencadena una respuesta inmune que permite la neutralización viral in vitro e in vivo. Teniendo en cuenta la importancia de estas enfermedades, las características de las proteínas mencionadas y las ventajas que ofrece el sistema de expresión en cloroplastos en cuanto a los niveles de expresión, en este trabajo se propone producir en plantas transplastómicas dos antígenos virales: el péptido del VFA comprendido entre los aminoácidos mencionados, fusionado a la enzima b-glucuronidasa (VP-bGUS), y la proteína VP8* del RVB.   Los niveles de expresión de los antígenos recombinantes en las plantas transplastómicas resultaron ser muy superiores a los obtenidos por transformación nuclear. Las proteínas recombinantes se pudieron observar directamente en un SDS-PAGE mediante tinción con Coomassie blue. Con el fin de evaluar la inmunogenicidad de las proteínas obtenidas, se procedió al estudio de la respuesta inmune en ratones. Tanto la proteína VP-bGUS como la proteína VP8* fueron capaces de inducir una respuesta humoral específica en los animales inmunizados con los extractos de las hojas de las plantas transformadas. En el caso particular del RVB, se realizó un estudio de protección en un modelo de ratón lactante. Ratones lactantes nacidos de hembras inmunizadas con la proteína VP8* recombinante resultaron protegidos frente a la infección con RVB.   Estos resultados demuestran la factibilidad del empleo de plantas transplastómicas como plataforma de expresión de antígenos.