• Estandarización de un método para la detección del Virus de la Lengua Azul a partir de muestras tomadas en papel de filtro

QUIROGA ESTEFANIA; JORDAN MAXIMILIANO; SUYAY ROLDAN JULIETA; MOREL VICTORIA; SALA JUAN; MARIA JOSE DUS SANTOS

Otro; XLIII Reunión anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2023

La Lengua Azul es una enfermedad considerada por la OMSA como de máxima importancia para el comercio internacional de animales y sus productos y de declaración obligatoria ante dicha organización. El diagnóstico del virus de la lengua azul (VLA) se efectúa a partir muestras de sangre de animales con signos clínicos o sospechosos y el método más recomendado es la RT-qPCR.En nuestro país, los laboratorios con capacidades técnicas para el diagnóstico del VLA son escasos y se encuentran en la provincia de Buenos Aires (SENASA y Laboratorio de Diagnóstico Virológico, IVIT). Las muestras de sangre colectadas deben, entonces, trasladarse a estos laboratorios para su procesamiento, lo que genera una gran dificultad debido a las condiciones necesarias para el transporte. Por ello, el desarrollo de metodologías que permitan optimizar la toma de muestras, su conservación y transporte seguro es de vital importancia La tecnología DBS (Dried Blood Spot) constituye una alternativa de muestreo para la detección diagnóstica de diferentes patógenos de interés humano y veterinario. La misma consiste en el uso de filtros de papel embebidos en agentes que lisan células, desnaturalizan proteínas, inmovilizan y protegen los ácidos nucleicos y tienen la capacidad de inactivar los virus presentes en la muestra. Esto permite su transporte y conservación a temperatura ambiente. Por todo lo expuesto, en el objetivo de este trabajo fue estandarizar y evaluar protocolos de muestreo para el VLA empleando la metodología DBS, a fin de lograr una adecuada conservación y transporte de muestras de sangre para el posterior diagnóstico.Para estandarizar las condiciones de obtención del ARN viral se contaminó artificialmente sangre bovina con virus titulado y cuantificado por RT-qPCR. Se evaluó la recuperación del ARN viral, siendo la hidratación con TE, incubación a 37°C por 30 minutos en agitación y posterior purificación del ARN con kit comercial, la condición más eficiente. El límite de detección del genoma viral a partir de las tarjetas fue de 102 cg/ul.Se evaluó, además, la estabilidad de la muestra en las tarjetas almacenando las mismas a 37°C, 25°C, 4°C, -20°C y -80°C por 1, 7, 30, 90, 180 y 360 días. Hasta el momento, se comprobó la estabilidad a todas las temperaturas hasta los 30 días de almacenamiento. Además, se confirmó la ausencia de material infeccioso en el eluído de la tarjeta.Finalmente, se realizó una evaluación preliminar a campo colectando muestras de sangre de bovinos y ovinos en tubo y en tarjetas. Las mismas fueron transportadas al laboratorio y analizadas con las metodologías estandarizadas. La concordancia de resultados detectables fue total, no obstante, los valores de Ct fueron superiores en las muestras sembradas en tarjetas.La metodología estandarizada representa un gran avance dentro del diagnóstico del VLA ya que permitirá que las muestras se trasladen sin refrigeración y con las condiciones de bioseguridad adecuadas sin perder capacidad diagnóstica.