Rol del análogo de la hormona paratiroidea (PTHrP) en la apoptosis y supervivencia de células Caco-2

LEZCANO, VIRGINIA; GENTILI CLAUDIA; ANA RUSSO DE BOLAND

Mar del Plata

Congreso; LVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2012

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)

Previamente se demostró que la hormona paratiroidea (PTH) induce apoptosis en las células Caco-2 derivadas de cáncer de colon humano, sin embargo, hasta el presente se desconoce el rol de su análogo tumoral PTHrP en estas células intestinales.  Para evaluar si PTHrP (10-8 M) induce apoptosis, las células Caco-2 fueron tratadas con la hormona por 24 y 72 horas en ausencia de suero, incubadas con Anexina V FITC/Ioduro de Propidio y luego analizadas por citometría de flujo. Adicionalmente, se estudió la integridad nuclear y mitocondrial por microscopía de fluorescencia. Se observó que ni la deprivación de suero ni PTHrP inducen apoptosis o necrosis. Para estudiar si PTHrP presenta un rol protectivo cuando se induce apoptosis, las células Caco-2 fueron incubadas con el análogo por 24 horas seguido de tratamiento con H2O2 (0,5 M por 4,5 horas). Luego, se evaluó la viabilidad celular por el método colorimétrico MTS y paralelamente, se estudió la activación de la proteína de supervivencia Akt y de las proteínas quinasas activadas por mitógenos (MAPKs) ERK 1/2, JNK y p38 mediante la técnica de Western blot. Se observó que el agente inductor de apoptosis H2O2 disminuye la viabilidad celular en un 50% y activa las MAPKs y Akt, sugiriendo que en situación de estrés estas vías de señalización son activadas para mediar respuestas de supervivencia celular. Empleando inhibidores específicos, se obtuvo evidencia que las MAPKs no participan en la respuesta de las células Caco-2 al H2O2. Se comprobó que PTHrP no es capaz de prevenir la muerte celular inducida por el estrés oxidativo en células Caco-2. En conjunto estos resultados sugieren que, contrariamente al efecto pro-apoptótico de PTH en las células Caco-2, su análogo tumoral no es capaz de inducir apoptosis ni tendría, bajo las condiciones experimentales estudiadas, un efecto protector frente al estrés oxidativo inducido por H2O2.