IDENTIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE PROTEÍNAS QUE INTERACTÚAN CON LA SUBUNIDAD C DEL FACTOR TRANSCRIPCIONAL PVNF-Y

MARINA BATTAGLIA, LUCÍA MAZZIOTA, FLAVIO A. BLANCO, MARÍA EUGENIA ZANETTI, MARIO AGUILAR

La Plata

Congreso; XXVIII Reunión Argentina de Fisiología Vegetal; 2010

Sociedad Argentina de Fisiología vegetal

Las leguminosas pueden establecer relaciones simbióticas con bacterias del suelo, dando como resultado la formación de nódulos y la fijación biológica de N2. Se ha reportado que las plantas de poroto (Phaseolus vulgaris) son noduladas preferencialmente por cepas de Rhizobium etli que provienen del mismo centro geográfico de domesticación (Aguilar et al. PNAS 101:13548). En un trabajo previo se identificaron genes de raíz de poroto mesoamericano que son regulados positivamente por cepas de la misma región (Peltzer Meschini et al. MPMI 21:4592). Uno de estos genes corresponde al gen PvNF-YC, que codifica la subunidad C del factor transcripcional heterotrimérico NF-Y. La reducción de los niveles de mRNA de PvNF-YC en raíces de poroto mediante RNA de interferencia (RNAi) produjo defectos en la iniciación y progresión de los hilos de infección, así como la reducción del número de nódulos. Con el objeto de identificar proteínas que interactúan con PvNF-YC se construyó una biblioteca de cDNA de raíces de poroto inoculadas con R.etli y se realizó un screening en el sistema de doble híbrido en levadura, utilizando PvNF-YC como carnada. A partir de los clones positivos se seleccionaron tres para su caracterización. Estos corresponden a un factor transcripcional con dominios de tipo GRAS, una tirosin-quinasa y una proteína con dominios LysM. Las interacciones están siendo validadas por retransformación y coinmunoprecipitación en levaduras y complementación bi-molecular de fluorescencia en hojas de Nicotiana benthamiana. Paralelamente, la función de estos genes está siendo evaluada en ensayos de silenciamiento mediado por RNAi y sobreexpresión. Estos estudios contribuirán a comprender las bases moleculares de la nodulación eficiente asociada a la preferencia de cepa surgida durante la coevolución entre los simbiontes.