Rol de p300/CBP en la progresión del adenocarcinoma mamario.

FERMENTO M.E; ANDRES NC; GANDINI NA; CURINO A. C.; FACCHINETTI M.M.

Mar del Plata

Congreso; LV Reunion Cientifica Anual de la Sociedad Argentina de Investigacion Clinica; 2010

Los carcinomas mamarios representan un grupo heterogéneo de tumores, que difieren en sus características, comportamiento y en la respuesta a la terapia; reflejando la necesidad de hallar nuevos marcadores moleculares que ayuden al diagnóstico, pronóstico y tratamiento. El p300 participa en varios procesos biológicos, funciona como co-factor transcripcional de proteínas nucleares, además es una histona acetiltransferasa que acetila también proteínas no histonas, afectando diferentes rutas de señalización. Evidencia reciente sugiere que los niveles de expresión de p300 están alterados en distintos tipos de cáncer y que juega un importante papel en la tumorigénesis. En trabajos previos realizados en nuestro laboratorio observamos una fuerte expresión e inusual localización citoplasmática de p300 en biopsias de tumores humanos.  Dado que existen pocos estudios acerca del rol del p300 en cáncer de mama y a partir de nuestros resultados previos, los objetivos del presente trabajo fueron estudiar la asociación de la expresión de p300 con la sobrevida y parámetros clínico-patológicos del paciente; y evaluar la acción de p300 sobre la proliferación/supervivencia celulares en una línea celular murina. Se estudió la expresión de p300 mediante tinción inmunohistoquímica de 70 carcinomas mamarios no invasivos y 8 glándulas mamarias normales. Se detectaron mayores porcentajes de expresión de p300 en los carcinomas (86 %) que en las glándulas  mamarias normales (50%; Chi cuadrado, p=0.012). Además, la expresión de p300 fue significativamente menor en las regiones histológicamente normales adyacentes al tumor (RAN) que en la zona tumoral (ZT; Mann Whitney, p< 0.0001). En cuanto a la localización subcelular, en las RAN el p300 fue detectado exclusivamente en núcleo mientras que en las ZT se observó expresión citoplasmática en el 70% de los casos. En las muestras de glándulas mamarias no malignas el 100% de ellas presentaba p300 nuclear. El estudio de supervivencia (n=40) mostró diferencias significativas asociadas con la expresión citoplasmática de p300, observándose una mayor sobrevida de los pacientes cuyos tumores presentaban localización citoplasmática (LogRank test, p< 0,0001).  Además, la asociación con parámetros clínico-patológicos tales como edad, estadío, grado nuclear y/o histológico, índice mitótico, receptor de estrógeno y/o progesterona no mostró diferencias significativas asociadas con la expresión de p300; en cambio la asociación con la clasificación del T del sistema del TNM mostró diferencias significativas asociadas con la expresión citoplasmática de p300, observándose   que los tumores de 2 cm o menos en su diámetro mayor (T=1) presentaban mayor expresión y  localización citoplasmática que en T2, T3 y T4 (Chi cuadrado, p< 0,05). Posteriormente, evaluamos el efecto de inhibidores selectivos de p300 en la proliferación/supervivencia celular mediante ensayo WST con posterior conteo celular manual. Se observó que la inhibición de p300 inducía una disminución en la cantidad de células tanto en la línea de adenocarcinoma mamario murino LM3 como en cultivos primarios de explanto tumoral de un modelo de cáncer mamario en ratas (DMBA) (p≤ 0,05 en ambos casos). Se estudió por western-blot la expresión de algunas proteínas reguladoras de la apoptosis y del ciclo celular, observando que la inhibición de p300 aumentaba los niveles de p21, manteniendo inalterados los niveles de ciclina D y E. En conclusión, los resultados obtenidos en biopsias humanas muestran que la localización de p300 en los tumores es mayormente citoplasmática y que esta inusual localización se asocia a una mejor sobrevida de los pacientes y a un menor tamaño tumoral. Por otro lado, los tratamientos in vitro demuestran que inhibidores del p300 inducen una disminución en la proliferación/supervivencia celular que se correlaciona con un aumento de p21. En conjunto, los resultados sugieren  que el p300 podría estar favoreciendo la proliferación celular, por una disminución de la apoptosis, en carcinomas mamarios y que su inhibición ya sea farmacológica o por localización subcelular alterada podría estar ejerciendo efectos antitumorales.