Estudio preliminar de polimorfismos génicos del virus Epstein-Barr (EBV) en linfomas de Hodgkin de Argentina y Brasil: identificación de variantes del gen BNLF-1

GUIRETTI, D.; VALVA, P.; PAOLA ANDREA CHABAY; DE MATTEO, E; ZALCBERG, I.; HASSAN, R.; PRECIADO, M. V.

Vaquerías

Congreso; XXVI Reunión Científica Anual de Sociedad Argentina de Virología; 2006

Sociedad Argentina de Virología

Introducción: El EBV es un virus oncogénico y linfotrópico relacionado a la patogénesis del linfoma de Hodgkin (LH). Existen 2 tipos, EBV-1 y EBV-2, que se diferencian por la presencia de polimorfismos en los genes EBNA2, 3A, 3B y 3C. Nuevos marcadores polimórficos en el gen BNLF1 que codifica para la oncoproteína LMP1, permiten distinguir variantes moleculares. Estudios previos sugieren que estas variantes presentan restricción geográfica y pueden contribuir al potencial oncogénico del virus. El objetivo de este trabajo fue estudiar la variabilidad molecular del gen BNLF1, en casos de LH EBV+ de Argentina y Brasil. Materiales y métodos: Se incluyeron 25 casos de LH de Argentina y 35 de Brasil. El EBV fue detectado por PCR y EBER-ISH y la expresión de LMP1, por inmunohistoquímica. Diferentes estrategias de PCR fueron realizadas para amplificar una región del gen EBNA2 para tipificación viral y para detectar los siguientes polimorfismos del gen BNLF1: región C-terminal (C-ter), incluyendo la presencia de la deleción de 30pb (LMP1 del) y de las repeticiones de 33pb. En un grupo seleccionado se realizó la secuenciación directa de los fragmentos del promotor (-205 a +41; Sandjev y col, 1997) y de las regiones N-ter (aa 1-30) y C-ter (aa 225-370) del gen BNLF1, utilizando un secuenciador MegaBace (Pharmacia Biotech). Resultados: El análisis de los casos mostró que 19/25 (76%) de Arg. fueron EBV-1 y 6/25 (24%) EVB-2, comparados con 30/35 (86%) EBV-1, 4/35 (11%) EVB-2 y un caso con ambos, de Br. En relación a del LMP1, 17/25 (68%) de los casos Arg. mostraron LMP1 del, 6/25 (24%) LMP1 tipo salvaje (LMP1 wt) y 2/25 (8%) con LMP-1 del/wt; mientras que de los casos Br., 20/35 (57%) fueron LMP1 del y 15/35 (43%) LMP1 wt. Las repeticiones de 33 pb en LMP1 mostraron un rango de 3 a 7, mediana de 5 en Arg. y 4 en Br. Secuencias del promotor, exón 1 y C-ter de LMP1 se estudiaron en un subgrupo de 16 muestras (12 Br. y 4 Arg.). La región C-ter mostró un patrón de mutaciones similar al descrito para otras regiones del mundo, clasificadas como variantes A-D (Sandvej y col, 1997). Un nuevo patrón de mutaciones fue descrito en el promotor de LMP1, que incluye mutaciones recurrentes, algunas similares a los tipos D/CAO y otras típicas de los casos estudiados (nt.-184 A>T; -63 A>C; -50 T>A; -39 A>C; -12 G>A; +18 T>G). El análisis conjunto de las tres regiones génicas permitió definir preliminarmente 3 grupos: (I) promotor sin mutaciones (excepto por -158 C>T), asociado a regiones N y C-ter de tipo B95.8/A y B (no delecionados); (II) promotor similar a D/CAO y algunas mutaciones únicas para casos Arg./Br. y región C-ter de tipo C/D (delecionada/wt); (III) promotor con mayor número de mutaciones únicas Arg./Br. y C-ter delecionado. El motivo ATF/CREB (-45 a -38), potente activador de la expresión, estuvo mutado en todos los casos de los grupos II y III, con mutaciones fijadas en -44 (D/CAO y grupo II) y -39 (grupo III, Arg./Br.), descartando la selección negativa de variantes ATF/CREB mutadas, en el LH de esta región geográfica. Las mutaciones por sustitución en los codones 2, 3 y 25 (E>D, H>L e L>I) de la región N-ter fueron características de los casos Arg./Br. Este estudio permitió comparar la variabilidad presente en el gen BNLF1 en casos de LH EBV+ de 2 regiones geográficas diferentes. Representa la primera descripción de promotores de este gen en EBV circulantes en Sudamérica y los resultados preliminares sugieren que las variantes identificadas pueden ser útiles como marcadores epidemiológicos. Se necesitan estudios más extensos, que incluyan individuos normales, para dilucidar el significado etiopatogénico de estos hallazgos moleculares.