Caracterización de variantes polimórficas en la infección por el virus de Epstein-Barr en pacientes pediátricos.

LORENZETTI, M.; PAOLA ANDREA CHABAY; MOSCATELLI G; FERNANDEZ C; MORONI S; ALTCHEH J; PRECIADO MV

Ciudad de Buenos Aires

Congreso; 10º Encuentro Nacional de Investigación pediátrica; 2008

Sociedad Argentina de Pediatria

El virus de Epstein Barr (EBV), agente causal de la mononucleosis infecciosa, es oncogénico y linfotrópico, de la familia herpesviridae. En Argentina la infección ocurre a temprana edad y cursa en general en forma subclínica. Existen 2 tipos virales, EBV1 y EBV2, que se diferencian por polimorfismos en los genes EBNA2, 3A, 3B y 3C. Por otro lado, existen marcadores polimórficos en los genes EBNA1, BZLF1 y LMP1, que permiten distinguir variantes virales. Se desconoce la distribución de éstas en niños. Objetivo: Estudiar la distribución de tipos y variantes virales de los genes EBNA1, BZLF1 y LMP1, en secreciones faríngeas y células mononucleares de sangre periférica (CMSP) de niños con infección por EBV. Métodos: Se estudiaron 6 pacientes con serología IgM+ por IFI para EBV. Se realizaron 4 estrategias de PCR: 1) EBNA3C (tipificación), 2) Región C terminal (Ct) de LMP-1, para determinar presencia de la deleción de 30pb (del30) y de repeticiones de 33pb, 3) Región Ct de EBNA1, 4) Región promotora de BZLF1. Se realizó la secuenciación directa de los amplicones. Se determinó la carga viral en plasma por PCR en tiempo real. Resultados: En la secreción faríngea los polimorfismos de los genes fueron: EBNA 3C (tipificación): 5/6 casos EBV1 y 1/6 EBV2; EBNA1: 2/6 P-thr´, 1/6 P-thr´´, 2/6 variante derivada de la línea Ag876, 1/6 no amplificó; BZLF1: 5/6 secuencia prototipo Zp-P, 1/6 secuencia derivada de la línea celular AG876; Ct de LMP1: 5/6 con del30 y 1/6 wild type, 1/6 con 4 ½ repeticiones más 1 inserción de 15 pb, 1/6 con 4 ½ rep. sin inserción, 1/6 con 5 ½ rep sin inserción, 3/6 con 5 ½ rep más 1 inserción. Además, en Ct de LMP1 se detectaron mutaciones puntuales previamente descriptas en 6/6 casos. Las muestras de CMSP fueron EBV negativas en 6/6 casos. La carga viral por PCR en tiempo real mostró valores inferiores al límite de detección (200 copias/ml). Conclusiones: En las secreciones de cada paciente se confirmó la infección con una única variante viral. Las variantes polimórficas para EBNA1 halladas coincidieron con otras previamente descriptas en pacientes adultos en otras regiones geográficas. Se observó una alta proporción (83%) de las variantes Zp-P de BZLF1 y del30 de LMP1, las cuales se habían descrito con mayor frecuencia en patologíasneoplásicas EBV+. Este trabajo constituye el primer estudio de variantes virales en pacientes pediátricos con infección aguda por EBVherpesviridae. En Argentina la infección ocurre a temprana edad y cursa en general en forma subclínica. Existen 2 tipos virales, EBV1 y EBV2, que se diferencian por polimorfismos en los genes EBNA2, 3A, 3B y 3C. Por otro lado, existen marcadores polimórficos en los genes EBNA1, BZLF1 y LMP1, que permiten distinguir variantes virales. Se desconoce la distribución de éstas en niños. Objetivo: Estudiar la distribución de tipos y variantes virales de los genes EBNA1, BZLF1 y LMP1, en secreciones faríngeas y células mononucleares de sangre periférica (CMSP) de niños con infección por EBV. Métodos: Se estudiaron 6 pacientes con serología IgM+ por IFI para EBV. Se realizaron 4 estrategias de PCR: 1) EBNA3C (tipificación), 2) Región C terminal (Ct) de LMP-1, para determinar presencia de la deleción de 30pb (del30) y de repeticiones de 33pb, 3) Región Ct de EBNA1, 4) Región promotora de BZLF1. Se realizó la secuenciación directa de los amplicones. Se determinó la carga viral en plasma por PCR en tiempo real. Resultados: En la secreción faríngea los polimorfismos de los genes fueron: EBNA 3C (tipificación): 5/6 casos EBV1 y 1/6 EBV2; EBNA1: 2/6 P-thr´, 1/6 P-thr´´, 2/6 variante derivada de la línea Ag876, 1/6 no amplificó; BZLF1: 5/6 secuencia prototipo Zp-P, 1/6 secuencia derivada de la línea celular AG876; Ct de LMP1: 5/6 con del30 y 1/6 wild type, 1/6 con 4 ½ repeticiones más 1 inserción de 15 pb, 1/6 con 4 ½ rep. sin inserción, 1/6 con 5 ½ rep sin inserción, 3/6 con 5 ½ rep más 1 inserción. Además, en Ct de LMP1 se detectaron mutaciones puntuales previamente descriptas en 6/6 casos. Las muestras de CMSP fueron EBV negativas en 6/6 casos. La carga viral por PCR en tiempo real mostró valores inferiores al límite de detección (200 copias/ml). Conclusiones: En las secreciones de cada paciente se confirmó la infección con una única variante viral. Las variantes polimórficas para EBNA1 halladas coincidieron con otras previamente descriptas en pacientes adultos en otras regiones geográficas. Se observó una alta proporción (83%) de las variantes Zp-P de BZLF1 y del30 de LMP1, las cuales se habían descrito con mayor frecuencia en patologíasneoplásicas EBV+. Este trabajo constituye el primer estudio de variantes virales en pacientes pediátricos con infección aguda por EBV