Análisis de la secuencia codificante completa del gen BNLF1, Proteína Latente de Membrana 1 (LMP1), del virus de Epstein Barr (EBV) en pacientes pediátricos con patología benigna y maligna asociada

GANTUZ, M; LORENZETTI, M.; ALTCHEH J; DE MATTEO, E; PAOLA ANDREA CHABAY; PRECIADO, M. V.

Buenos Aires

Congreso; XXXIII Reunión Científica Anual de SAV; 2013

Sociedad Argentina de Virología

Introducción: El EBV, virus linfotrópico y oncogénico, es agente causal de la Mononucleosis Infecciosa (MNI). Su ciclo latente de infección se asocia a procesos linfoproliferativos y linfomas. LMP1, proteína oncogénica del EBV, mimetiza un receptor constitutivamente activado y estimula, independientemente de ligando, las vías de señalización MAPK/ERK, P13K/AKT, NF-kB, JNK. Las variantes de la región más caracterizada, la C-Terminal (aa 195 al 389), se nombran según el lugar en el que se aislaron: China1, China2, China3, Mediterránea+, Mediterránea-, Alaskan, North Carolina. La variación de las regiones N-terminal citoplasmática (aa 1 al 24) y de 6 dominios transmembrana (25 al 196) ha sido menos explorada, especialmente en niños. Se ha postulado que los polimorfismos F144I, I124V/I152L y F144I/D150A/L152L en los dominios 4 y 5 podrían relacionarse con la linfomagénesis ya que involucra la señalización vía NF-kB. Objetivo: Identificar y caracterizar las variantes moleculares del gen BNLF1, en muestras de pacientes pediátricos con MNI y con linfoma a fin de relacionarlas con la linfomagénesis. Materiales y Métodos: Se analizaron muestras pediátricas de secreciones faríngeas (SF) de 15 casos de MNI (detección por IFI de anticuerpos anti-cápside viral IgM+) y de 26 biopsias ganglionares de linfomas (L) EBV+ (hibridación in situ para EBERs). Se amplificó por PCR anidada la región codificante completa de BNLF1 y se secuenció. Se realizó el alineamiento con Bioedit, el estadístico X² con GraphPad InStat, la reconstrucción filogenética por máxima verosimilitud en PhyML, incluyendo secuencias disponibles en GenBank. Resultados: En región N-Ter se observó la pérdida del sitio de restricción Xho1 (CTCGAG) en el 26% de los L y en el 13% de las MNI, pero sin diferencia significativa (p>0.05). La región Transmembrana, en comparación a la secuencia de la línea celular prototípica B95.8, presentó polimorfismos tanto en los dominios como en las regiones interdominios en ambas patologías: F144I se observó en 44% L y 20% MNI, I124V/I152L en 50% L y 46% MNI y F144I/D150A/L152L en 23% L y 6% MNI, ninguno de los polimorfismos mostró asociación significativa (p>0.05) con las patologías. En la región C-Terminal observamos por agrupamientos filogenéticos que la variante predominante fue China1 en L y MNI (18/26 L, 8/15 MNI). En menor proporción Alaskan (5/26 L), Mediterránea- (1/26 L, 3/15 MNI), Mediterránea+ (1/15 MNI), China 2 (1/26 L, 3/15 MNI), B95.8 (1/26 L). Conclusión: Se describió por primera vez en pacientes pediátricos de Argentina los polimorfismos de las regiones N-Terminal y Transmembrana. Según el C-Terminal la mayoría de los aislamientos agruparon con la variante China 1, confirmando que es la de mayor distribución en Argentina. Si bien ciertos polimorfismos (N-ter y Transmembrana) vinculados a linfomagénesis mostraron mayor predominio en los L, se requiere analizar un mayor número de muestras para confirmar el significado patológico de esta observación.