Análisis de la secuencia del promotor de la Proteína Latente de Membrana 1 (LMP1) del virus de Epstein Barr (EBV) en pacientes pediátricos con patología benigna y maligna asociada al virus

GANTUZ, M; LORENZETTI, M.; ALTCHEH J; DE MATTEO, E; PAOLA ANDREA CHABAY; PRECIADO, M. V.

Vaquerías, Córdoba

Congreso; XXXII Reunión Científica Anual de SAV. 4-7 de diciembre 2012, Vaquerías, Córdoba; 2012

Introducción: El EBV, agente causal de la mononucleosis infecciosa (MNI), ha sido relacionado con diferentes linfomas y carcinomas. La oncoproteína de latencia viral, LMP1, se transcribe a partir del promotor ED-L1. En él se han descrito mutaciones en las regiones regulatorias (AP2, PU-box, CRE, NF-kBA) y se postula que la variación en su secuencia puede influír en la regulación de la expresión y en consecuencia en el potencial oncogénico de LMP1. Objetivo: Estudiar las variantes de ED-L1 en muestras de pacientes pediátricos con MNI y linfomas. Caracterizar las mutaciones en los sitios de unión de factores de transcripción y su potencial asociación a patologías benignas o malignas EBV+. Métodos: Se analizaron: i) muestras pareadas de secreciones faríngeas y de células mononucleares de sangre periférica de 17 MNI pediátricas (detección por IFI de anticuerpos IgM anti-cápside viral) y ii) 27 biopsias ganglionares de linfomas pediátricos EBV+ (hibridación in situ para EBERs). ED-L1 (-1 a -340) se amplificó por PCR anidada y secuenció. Las coinfecciones se confirmaron por el clonado en el vector TOPO TA. Los resultados se analizaron con Bioedit (versión 7.0), y se realizó la reconstrucción filogenética por máxima verosimilitud con el programa PhyML incluyendo en el análisis secuencias disponibles en GenBank. Se analizó compartimentación con BaTS. Resultados: A partir del análisis filogenético se identificaron cuatro clusters principales que fueron designados como B95.8, Raji, P3HR1 y Cao. Del total de los 61 aislamientos, 49 agruparon con B95.8 (80,3%), 2 con P3HR1 (3,27%), 4 con Cao (6,55%) y 6 con Raji (9,83%). Treinta y uno de 49 mostraron 100% de identidad con B95.8 mientras que en los 18 restantes se observó más del 98% de identidad. Todas las secuencias agrupadas con Cao y P3HR1 mostraron variaciones con respecto a éstas, en cambio la mayoría de los aislamientos definidos como Raji (4/6) mostraron una identidad del 100% con ella. Se observó coinfección en 5/17 casos de MNI, pero no se observó una compartimentación preferencial de variantes en el análisis conjunto de los casos. En 23/61 aislamientos se encontraron mutaciones en alguno de los sitios de unión a factores de trascripción SP1/SP3, CRE, AP2, C/EBP y algunas de ellas no habían sido descriptas previamente ni en líneas celulares ni en aislamientos de pacientes. Conclusión: La mayoría de los aislamientos corresponden a variantes relacionadas con B95.8 y por lo tanto no se observó una asociación con patología maligna EBV+. Se confirmaron para ED-L1 resultados previos de nuestro país que indican que en niños se observa la infección por una única variante viral en la mayoría de los casos, a diferencia que en adultos. En MNI no se observó una distribución preferencial de variantes entre compartimentos. Se hallaron mutaciones en sitios de unión a factores de transcripción que podrían afectar la actividad del promotor, algunas no descriptas previamente, indicando la necesidad de nuevos estudios funcionales en estos sitios.