Detección de antígenos de EBV por métodos no convencionales en LDCGB de Argentina diagnosticados como EBV negativos

MANGIATERRA T; DE DIOS SOLER, M; OVIEDO M; COLLI, S.; PRECIADO, M. V.; DE MATTEO, E; PAOLA ANDREA CHABAY

Vaquerías

Congreso; Reunión Anual Sociedad Argentina de Virología; 2022

SAV

Introducción: El Linfoma Difuso a Grandes Células B (LDGCB) es el subtipo más común de Linfomas No-Hodgkin. En 2017, la OMS confirmó una nueva entidad, EBV+LDCGB, NOS. La prevalencia de EBV+ LDCGB, NOS varía entre 3 a 14% dependiendo del área geográfica. Los linfomas asociados a EBV muestran un patrón de expresión diferencial de genes de latencia como LMP1 y EBNA2. Se describió la detección de trazas de EBV por métodos ultrasensibles, revelando que el virus podría estar involucrado en la patogénesis del LDGCB en casos originalmente considerados negativos mediante técnicas convencionales. El objetivo de este estudio fue detectar transcriptos virales LMP1 y EBNA2 con un método más sensible, y comparar la expresión de hibridización in situ de EBERs (ISH).Metodos: se analizaron 47 casos de LDCGB. La media de edad fue de 27 (2 a 73 años). Se realizó hibridación in situ (HIS) para EBERs en biopsias fijadas en formol y embebidas en parafina. Por otro lado, se detectaron transcriptos de LMP1 y EBNA2 mediante doble ISH con ViewRNA ISH Tissue 2-Plex Assay (Affymetrix). Se realizó el recuento de células positivas con transcriptos de LMP1+, EBNA2+, y dobles LMP1+/EBNA2+ en células tumorales y en células del microambiente, expresadas como cél/mm2. Además, se realizó una qPCR para determinar la carga viral, expresada como copias/ug ADN. Resultados: se detectó EBV por ISH para EBERs en 10.6% (5/47) de los casos. Mediante doble ViewRNA ISH, la expresión de LMP1 y EBNA2 en células individuales se observó en 2/5 casos con células EBERs+ (media 167.5 cel/mm2 para LMP1 y 9.21 cel/mm2 para EBNA2). La expresión de transcriptos de LMP1 se encontró además en el microambiente en algunas células. De los 42 casos EBERs-, la expresión de LMP1 se detectó en 14/42 (33.3%) de los casos (media 30.6 cel/mm2), y la expresión de EBNA2 se observó en el 7% (3/42) de los casos (media 22.2 cel/mm2 ). En 10 y 2 casos, se observó expresión de LMP1 y EBNA2 en el microambiente, respectivamente. En 5 casos LMP1 se expresó sólo en el microambiente. La carga viral media en los casos que expresaron transcriptos EBERs+ fue de 196 copias/ug de ADN, mientras en los que expresaron transcriptos para LMP1 y EBNA2 sin células EBERs+ estuvo por debajo del límite de detección. Conclusión: Este estudio aporta evidencias que el EBV podría detectarse en células tumorales en LDCGB por métodos no convencionales, en una población con alta incidencia de infección por EBV en niños, y que el virus podría estar implicado en la patogénesis de los LDCGB en más casos de los que se consideran originalmente.