Factores de restricción viral en la infección con virus Junín

PEÑA, JOSÉ; MORELL, LAURA; CORDO, SANDRA; GARCIA, CYBELE

Jornada; XXXIII Reunión Científica Anual de la SAV; 2013

La búsqueda de nuevos blancos terapéuticos se centra hoy en día en los enfoques basados en blancos celulares, así como también factores celulares de restricción viral, que puedan ser utilizados contra un amplio espectro de patógenos, y que no permitan la aparición de especies mutantes resistentes. Un punto importante a considerar en estas estrategias son las interacciones necesarias de las proteínas virales con la célula hospedadora. La respuesta inmune innata es la primera línea de defensa contra los patógenos. Se sabe que el principal receptor de reconocimiento de patrones (PRR) que sensa la entrada de RNA viral de cadena simple (ssRNA) en el citoplasma celular es el gen 1 inducible por ácido retinoico (RIG-I, retinoic acid-inducible gene 1). La activación de este PRR induce la producción de IFN a través de la activación del factor regulatorio de IFN 3 (IRF3). En consecuencia de la producción de IFN, nuevas señales son secretadas y activan la vía JAK/STAT para finalmente inducir la síntesis de genes estimulados por IFN (Interferon stimulated genes, ISGs), como viperina (VIP), que actuaría inhibiendo alguna de las etapas de la replicación de este tipo de patógenos. VIP es una proteína asociada a retículo, reportada como factor de restricción viral para los virus influenza, hepatitis B y C, West Nile y dengue. En el presente trabajo se estudió el rol de VIP como posible factor celular de restricción durante la infección con el virus Junín (JUNV). En primer lugar se analizó la expresión de mRNAs de RIG-I y VIP en la línea celular humana A549 (carcinoma de pulmón), luego de 24 y 48 h de infección con JUNV. Para todos los experimentos se incluyó, como control positivo, el virus dengue por estar ampliamente reportada la activación de RIG-I y VIP en la infección con DENV. Se observó un aumento de estos mRNAs celulares estudiados tanto a las 24 como a las 48 h p.i. cuando las células fueron con JUNV, así como cuando fueron infectadas con DENV. Asimismo, se evaluaron los niveles relativos de expresión de mRNAs de otros efectores que participan en esta vía de señalización, como TLR3, TLR7, MyD88, TRAF6, encontrandose todos significativamente aumentados. También se observó un aumento de IL-6, lo que confirma que este tipo de infecciones in vitro activan los ISGs. Finalmente, con el fin de caracterizar el rol antiviral de VIP en la infección con JUNV, se transfectaron las células con siRNAs específicos para VIP, y luego fueron infectadas con JUNV, evaluando el rendimiento viral a las 48 h p.i. en las células donde la expresión de VIP fue silenciada, con respecto a las sin silenciar. Tanto las UFPs encontradas, como los niveles relativos de mRNAs virales fueron 10 veces más en las células donde la expresión de VIP estaba reducida por los siRNAs, con respecto a lo observado en los cultivos celulares infectados con JUNV donde VIP no estaba silenciada. Esto indicaría un rol antiviral de VIP en la infección con JUNV. Nuestro próximo objetivo es evaluar si VIP estaría interactuando con alguna de las proteínas de JUNV para cumplir esta función o si es un efecto indirecto a través de la alteración de estructuras celulares que necesita JUNV para su replicación.